4.酶解法(enzymatic lysis) 外加酶法： 根据细胞壁的结构和组成特点，选用适当的酶。 自溶法(autolysis): 细胞结构在本身具有的各种水解酶作用下发 生溶解的现象
⚫4.酶解法（enzymatic lysis）： ⚫ 外加酶法： ⚫ 根据细胞壁的结构和组成特点，选用适当的酶。 ⚫ 自溶法（autolysis）: ⚫ 细胞结构在本身具有的各种水解酶作用下发 ⚫生溶解的现象
细胞对破碎方法的敏感性 细胞 声波机械渗透压冻融 动植物 ++++++ 革兰氏阴性菌 革兰氏阳性芽孢菌++ 酵母 + 革兰氏阳性球菌 菌丝 孢子
细胞对破碎方法的敏感性 ⚫ 细胞 声波 机械 渗透压 冻融 ⚫ ———————————————————— ⚫ 动植物 +++ +++ +++ +++ ⚫ 革兰氏阴性菌 ++ ++ ++ ++ ⚫ 革兰氏阳性芽孢菌 ++ + ++ + ⚫ 酵母 + + + + ⚫ 革兰氏阳性球菌 + - + + ⚫ 菌丝 - ++ - ++ ⚫ 孢子 - - - -
(三)细胞破碎确认 1.直接测定破碎前后的细胞数： 破碎前，用显微镜或电子微粒计数器直接计数； 破碎后，用染色法区分破碎细胞与完整细胞。 2.测定导电率： 利用破碎前后导电率的变化测定破碎程度。 3.测定释放的蛋白质量或酶活力： 测定破碎液中胞内蛋白质或目的酶的释放量， 估算破碎率
（三）细胞破碎确认 1.直接测定破碎前后的细胞数： 破碎前，用显微镜或电子微粒计数器直接计数； 破碎后，用染色法区分破碎细胞与完整细胞。 2.测定导电率： 利用破碎前后导电率的变化测定破碎程度。 3.测定释放的蛋白质量或酶活力： 测定破碎液中胞内蛋白质或目的酶的释放量， 估算破碎率
三、 酶的提取(extraction) 把酶从生物组织或细胞中以溶解状态释放 出来的过程，即将尽可能多的酶，尽量少的杂 质从原料中引入溶液
三、酶的提取(extraction) ⚫ 把酶从生物组织或细胞中以溶解状态释放 出来的过程，即将尽可能多的酶，尽量少的杂 质从原料中引入溶液。 ⚫
提取目标： a.将目的酶最大限度地溶解出来。 b。保持生物活性。 注意：温度升高，溶解度加大。但为防止酶失活， 一般采用低温下(0~10℃)操作
提取目标： a. 将目的酶最大限度地溶解出来。 b. 保持生物活性。 ⚫ 注意：温度升高，溶解度加大。但为防止酶失活， ⚫ 一般采用低温下（0~10℃）操作