一、 限制酶 限制性内切核酸酶restrictive endonucle- ases),又称限制酶。是特异性地切断DNA链 中磷酸二酯键的核酸酶。(“分子手术刀”) ●发现于原核生物体内，现已分离出100多种， 几乎所有的原核生物都含有这种酶。是重组 DNA技术和基因诊断中重要的一类工具酶
6 一、限制酶 ⚫ 限制性内切核酸酶(restrictive endonucleases)，又称限制酶。是特异性地切断DNA链 中磷酸二酯键的核酸酶。（“分子手术刀”） ⚫ 发现于原核生物体内，现已分离出100多种， 几乎所有的原核生物都含有这种酶。是重组 DNA技术和基因诊断中重要的一类工具酶
1、限制酶的命名 ·根据其来源命名。如： 属名菌株名 E coRI 种名 编号 ·EcoRI来源于大肠杆菌E.coli的RY13菌株，I 指在该菌株中分离的第一个限制酶
7 1、限制酶的命名 ⚫ 根据其来源命名。如： 属名 菌株名 E co R I 种名 编号 ⚫ EcoRI来源于大肠杆菌E.coli的RY13菌株,I 指在该菌株中分离的第一个限制酶
2、限制酶识别序列和切割形式 ·每种限制酶能识别和切割的通常4~8个核苷酸序列， 称为限制性位点(restriction sites)或切点。 如：HareⅢ5’-GGcC-3' 3'-CCGG-5' BamHⅡ5'-GGATCC-3 3'-CCTAGG-5' 平末端blunt end)对称轴切，连接效果差 切割形式 粘性末端(sticky end)交错切
8 2、限制酶识别序列和切割形式 ⚫ 每种限制酶能识别和切割的通常4~8个核苷酸序列， 称为限制性位点（restriction sites）或切点。 如：Hare III 5’-GGCC- 3’ 3’-CCGG- 5’ Bam HI 5’-GGATCC-3` 3’-CCTAGG- 5’ 平末端(blunt end) 对称轴切，连接效果差 切割形式 粘性末端（sticky end）交错切
Hpe I 5GT-T□AA-c3 3c-AA☒TTHs5 CUT Eco Rl saAA国Ha3 3c-T□THAHAG5 Hind 5A☒A-s-cTT☑3 3HTHCHGHA A5 CUT -CHTHGHCHAG3 3HGAHCHGHTHCF5 CUT Pst I
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限制性内切核酸酶 5'-GGCC-3 5-GG cc-3' HaeΠ 3-CCGG-5' 3'-CC GG-5 5-GATC-3 5'-GATC- 3 Mbo I 3-CTAG-5 5 3-CTAG-5 5 GGATCC-3' BamHI G 5一GATCC-3 3-CCTAGG-5 3 G一5 CCTAG-5 5-CTGCAG-3 5-CTGCA-3 Pst I G-3 3-GACGTC-5 3’-G 3-ACGTC-5
10 5’ － C T G C A G － 3’ 3’ － G A C G T C － 5’ 5’ － G G A T C C － 3’ 3’ － C C T A G G － 5’ 5’ － G A T C － 3’ 3’ － C T A G － 5’ 5’－ G G 3’－ C C C C － 3’ G G － 5’ 5’ － G G C C － 3’ 3’ － C C G G － 5’ HaeⅢ MboⅠ BamHⅠ PstⅠ 5’ － 3’ － C T A G － 5’ 5’ － G A T C － 3’ － 5’ 5’ － G 3’ － C C T A G － 5’ 5’ － G A T C C － 3’ G － 5’ 5’ － C T G C A － 3’ 3’ － G G － 3’ 3’ － A C G T C － 5’ 限制性内切核酸酶