(5)SupF琥珀突变抑制基因 终止密码:UAA(赭石),UAG(琥珀),UGA(乳白) SupF编码细菌的抑制性tRNA,在某一宿主中含具琥珀突 变的tetr和amp',只有当含SupF的质粒转入后,宿主才会对 amp和tet具抗性。 (6)其它正向选择标记 质粒可编码一种使某些宿主菌致死的记忆产物,而含有外 源基因片段插入后,该基因便失活
(5) Sup F琥珀突变抑制基因 终止密码:UAA(赭石),UAG(琥珀),UGA(乳白) Sup F编码细菌的抑制性tRNA,在某一宿主中含具琥珀突 变的tetr和ampr,只有当含Sup F的质粒转入后,宿主才会对 amp和tet具抗性。 (6)其它 正向选择标记 质粒可编码一种使某些宿主菌致死的记忆产物,而含有外 源基因片段插入后,该基因便失活
筛选标记 插入失活:在质粒pBR322的抗四环素基 因上插入一个外源基因后,导致抗四环 素基因失活,变成只对氨苄青霉素有抗 性,这样就可通过对抗生素是双抗还是 单抗来筛选是否有外源基因片段插入到 载体中,这种筛选方法称为插入失活
筛选标记 插入失活:在质粒pBR322的抗四环素基 因上插入一个外源基因后,导致抗四环 素基因失活,变成只对氨苄青霉素有抗 性,这样就可通过对抗生素是双抗还是 单抗来筛选是否有外源基因片段插入到 载体中,这种筛选方法称为插入失活
TcR pBR322 、 Baro HI 外源DNA Bar HI片段 + Ap周体培养基平板 (主平板) Tc固休培养基平板
筛选标记 u-互补(o-complementation) LacZ'基因的互补 阝-半乳糖苷酶1024aa LacZ 宿主 LacZ△M15 编码缺失第11-41位氨基酸 140aa 载体 LacZ 140 aa+MCS
筛选标记 α-互补 (α-complementation) Lac Z´基因的互补 编码缺失第11-41位氨基酸 宿主 LacZ LacZ ΔM15 β -半乳糖苷酶 1024 aa 载体 140 aa 140 aa+MCS LacZ´
IPTG:异丙基-B-D-硫代半乳糖苷 Isopropyl-B-D-Thiogalactoside 诱导物 X-gal:5-溴-4-氯-3-吲哚-B-D-半乳糖苷 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-B-D-Galactoside 底物(生色剂) β-半乳糖苷酶分解x-gal形成蓝色产物 MCS:Multiple cloning sites
IPTG:异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 Isopropyl-β-D-Thiogalactoside 诱导物 X-gal:5-溴-4-氯-3-吲哚- β-D-半乳糖苷 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside 底物(生色剂) β-半乳糖苷酶分解x-gal形成蓝色产物 MCS:Multiple cloning sites