第三节外源基因在真核细胞中的表达 c酵母基因表达载体 酵母载体可以携带外源基因在酵母细胞内保存和复制, 并随酵母分裂传递到子代DNA和RNA单位。 酵母菌中的野生型质粒 酵母菌克隆表达质粒的构建
第三节外源基因在真核细胞中的表达 C 酵母基因表达载体 酵母载体可以携带外源基因在酵母细胞内保存和复制， 并随酵母分裂传递到子代DNA和RNA单位。 酵母菌中的野生型质粒 酵母菌克隆表达质粒的构建
第三节外源基因在真核细胞中的表达 DNA复制起始区(含两类复制起始序列) 选择标记(营养缺陷型或显性选择标记) 有丝分裂稳定区 表达盒(启动子、分泌信号序列、终止子等)
第三节外源基因在真核细胞中的表达 DNA复制起始区（含两类复制起始序列） 选择标记（营养缺陷型或显性选择标记） 有丝分裂稳定区 表达盒(启动子、分泌信号序列、终止子等)
第三节外源基因在真核细胞中的表达 营养缺陷型的互补基因 营养缺陷型互补基因主要有氨基酸和核苷酸生物合成基因,如: LEU、TRP、HIS、LYS、URA、ADE 但对于多倍体酵母来说,筛选营养缺陷型的受体非常困难
第三节外源基因在真核细胞中的表达 营养缺陷型互补基因主要有氨基酸和核苷酸生物合成基因，如： LEU、TRP、HIS、LYS、URA、ADE 但对于多倍体酵母来说，筛选营养缺陷型的受体非常困难
第三节外源基因在真核细胞中的表达 酵母基因表达载体的种类: YRp类( yeast replication plasmid自主复制型质粒) YEp类( yeast episomal plasmid附加体质粒) Ylp类( yeast integrative plasmid整合型质粒) YCp类( yeast centromeric plasmid着丝粒质粒) YAC酵母人工染色体
第三节外源基因在真核细胞中的表达 酵母基因表达载体的种类： YRp类（yeast replication plasmid 自主复制型质粒） YEp类（yeast episomal plasmid 附加体质粒） YIp类（yeast integrative plasmid 整合型质粒） YCp类（yeast centromeric plasmid 着丝粒质粒） YAC 酵母人工染色体
第三节外源基因在真核细胞中的表达 含有ARS的YRp质粒的构建 ARS为酵母菌中的自主复制序列,08-1.5kb,染色体上每 30-40kb就有一个ARS元件。酵母菌自主复制型质粒的构建组成 包括复制子、标记基因、提供克隆位点的大肠杆菌质粒DNA。 以ARS为复制子的质粒称为YRp 以2质粒上的复制元件为复制子的质粒称为Yep 上述两类质粒在酿酒酵母中的拷贝数最高可达200个,但培 养几代后,质粒的丢失率高达50%-70%,主要是由于分配不均 匀所致
第三节外源基因在真核细胞中的表达 含有ARS的YRp质粒的构建： ARS为酵母菌中的自主复制序列，0.8--1.5kb，染色体上每 30--40kb就有一个ARS元件。酵母菌自主复制型质粒的构建组成 包括复制子、标记基因、提供克隆位点的大肠杆菌质粒DNA。 以ARS为复制子的质粒称为YRp 以2μ质粒上的复制元件为复制子的质粒称为Yep 上述两类质粒在酿酒酵母中的拷贝数最高可达200个，但培 养几代后，质粒的丢失率高达50%--70%，主要是由于分配不均 匀所致