第三节外源基因在真核细胞中的表达 二、真核生物基因表达载体的组成特征 CaMV35s promoter Ncol() Reporter gene(s) BgllI (8 Lac Z alpha MI(29 SpeI(15) Histidine tag Pm!I(52) Multiple Cloning Site BstEII (62) Nos poly-A CaMv35s promoter T-Border(right Plant selection gene General structure of pVS sta CaMav35S po ly A pCAMBIA vectors T-Border(lefn Bacterial s election gene pVs rep BR322 ori pBR322 bom
第三节外源基因在真核细胞中的表达 二、真核生物基因表达载体的组成特征
第三节外源基因在真核细胞中的表达 三、真核表达的受体系统 1酵母表达系统 酵母是一类最简单的真核生物其生长代谢与原核生 物相似;但在基因表达与调控方面类似于高等生物
第三节外源基因在真核细胞中的表达 三、真核表达的受体系统 1.酵母表达系统 酵母是一类最简单的真核生物,其生长代谢与原核生 物相似；但在基因表达与调控方面类似于高等生物
第三节外源基因在真核细胞中的表达 A酵母菌作为表达外源基因受体菌的特征 酵母菌是一群以芽殖或裂殖方式进行无性繁殖的单细胞 真核生物。如果说大肠杆菌是外源基因最成熟的原核生物表 达系统,则酵母菌是最成熟的真核生物表达系统
第三节外源基因在真核细胞中的表达 A 酵母菌作为表达外源基因受体菌的特征 酵母菌是一群以芽殖或裂殖方式进行无性繁殖的单细胞 真核生物。如果说大肠杆菌是外源基因最成熟的原核生物表 达系统，则酵母菌是最成熟的真核生物表达系统
第三节外源基因在真核细胞中的表达 酵母菌表达外源基因的优势 ◆全基因组测序,基因表达调控机理比较清楚,遗传操作简便 ◆能将外源基因表达产物分泌至培养基中 ◆具有原核细菌无法比拟的真核蛋白翻译后加工系统 ◆大规模发酵历史悠久、技术成熟、工艺简单、成本低廉 ◆不含有特异性的病毒、不产内毒素,美国FDA认定为安全的 基因工程受体系统(GRAS) ◆酵母菌是最简单的真核模式生物
第三节外源基因在真核细胞中的表达 酵母菌表达外源基因的优势 ◆全基因组测序，基因表达调控机理比较清楚，遗传操作简便 ◆能将外源基因表达产物分泌至培养基中 ◆具有原核细菌无法比拟的真核蛋白翻译后加工系统 ◆大规模发酵历史悠久、技术成熟、工艺简单、成本低廉 ◆不含有特异性的病毒、不产内毒素，美国FDA认定为安全的 基因工程受体系统（GRAS） ◆酵母菌是最简单的真核模式生物
第三节外源基因在真核细胞中的表达 B常用的宿主 酿酒酵母宿主菌 巴斯德毕赤酵母宿主菌 乳酸克努维酵母宿主菌 多型汉森酵母宿主菌 其中酿酒酵母的遗传学和分子生物学研究最为详尽, 但巴斯德毕赤酵母表达外源基因最理想 由毕赤酵母表达应用于临床的蛋白目前有胰岛素,乙型肝炎表面抗原( HBsAg) 肿瘤坏死因子(TNF)、表皮生长因子(EGF、人血清白蛋白,以及多种抗体等
第三节外源基因在真核细胞中的表达 B 常用的宿主 酿酒酵母宿主菌 巴斯德毕赤酵母宿主菌 乳酸克努维酵母宿主菌 多型汉森酵母宿主菌 其中酿酒酵母的遗传学和分子生物学研究最为详尽， 但巴斯德毕赤酵母表达外源基因最理想。 由毕赤酵母表达应用于临床的蛋白目前有胰岛素，乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、 肿瘤坏死因子(TNF)、表皮生长因子(EGF)、人血清白蛋白，以及多种抗体等