分子克隆工具酶及其应用
分子克隆工具酶及其应用
分子克隆工具酶及其应用 限制性内切酶主要用于DNA分子的特异切割 DNA甲基化酶用于DNA分子的甲基化 ●核酸酶用于DNA和RNA的非特异性切割 ●核酸聚合酶用于DNA和RNA的合成 ●核酸连接酶用于DNA和RNA的连接 ●核酸末端修饰酶用于DNA和RNA的未端修饰 其它酶类-用于生物细胞的破壁、转化、核酸纯 化、检测等
分子克隆工具酶及其应用 ⚫ 限制性内切酶—主要用于DNA分子的特异切割 ⚫ DNA甲基化酶—用于DNA分子的甲基化 ⚫ 核酸酶—用于DNA和RNA的非特异性切割 ⚫ 核酸聚合酶—用于DNA和RNA的合成 ⚫ 核酸连接酶—用于DNA和RNA的连接 ⚫ 核酸末端修饰酶—用于DNA和RNA的末端修饰 ⚫ 其它酶类--用于生物细胞的破壁、转化、核酸纯 化、检测等
第一节 限制性内切核酸酶
第一节 限制性内切核酸酶
限制性内切酶的发现 1.细菌限制修饰系统的发现 Werner arber于1962-1968年发现,1968年分离到I 型限制酶。 2.限制酶HndI的发现 H.O. Smith和 Wilcox于1970年首次从流感嗜血 杆菌(H.i/mene)中发现并分离到Hind限制酶。 3.SV40限制图谱和转录图谱的绘制 D. Nathans(1971年)用Hind绘制Sv40的限制 酶谱
一 . 限制性内切酶的发现 1. 细菌限制修饰系统的发现 Werner Arber于1962-1968年发现，1968年分离到I 型限制酶。 2. 限制酶HindII的发现 H．O．Smith 和Wilox 于1970年首次从流感嗜血 杆菌（H. influenzae）中发现并分离到HindII限制酶。 3. SV40 限制图谱和转录图谱的绘制 D. Nathans（1971年）用HindII绘制SV40的限制 酶谱
限制修饰系统的种类 1.I型:由三个基因构成,hsR;hslM;hss (host specificity for DNA restriction modification and specificity)位于染色体上, 个基因构成一个复合体,限制酶需要ATP、Mg2+ SAM(5—腺苷甲硫氨酸)。 2.Ⅱ型:限制与修饰基因产物独立起作用,在B cOl冲中这两种基因位于质粒上。 3.I型:修饰酶与I型酶相同,sM与hsdS基 因产物结合成一亚单位,限制酶是独立存在的 上述三个系统中,只有Ⅱ型限制酶与甲基化酶具 有相当高的核苷酸识别特异性,因而被广泛用于 基因工程中
二 . 限制修饰系统的种类 1. I型：由三个基因构成，hsdR；hsdM；hsdS （host specificity for DNA restriction modification and specificity）位于染色体上，三 个基因构成一个复合体，限制酶需要ATP、Mg2+ 、 SAM（５—腺苷甲硫氨酸）。 2. II型：限制与修饰基因产物独立起作用，在Ｅ. coli中这两种基因位于质粒上。 3. III型：修饰酶与Ｉ型酶相同，hsdＭ与hsdＳ基 因产物结合成一亚单位，限制酶是独立存在的。 上述三个系统中，只有II型限制酶与甲基化酶具 有相当高的核苷酸识别特异性，因而被广泛用于 基因工程中