第二节基因组文库的构建与基因分离 基因组文库( genomic ibrary) 基因组文库:将某一生物基因组DNA片段化并全 部克隆后所获得的重组子群体的总称。理论上讲,这些 重组载体上带有了该生物体的全部基因。 操作:将某种生物细胞的整个基因组DNA切割成 大小合适的片断,并将所有这些片断都与适当的载体连 接,引入相应的宿主细胞中保存和扩增
基因组文库：将某一生物基因组DNA片段化并全 部克隆后所获得的重组子群体的总称。理论上讲，这些 重组载体上带有了该生物体的全部基因。 操作：将某种生物细胞的整个基因组DNA切割成 大小合适的片断，并将所有这些片断都与适当的载体连 接，引入相应的宿主细胞中保存和扩增。 第二节基因组文库的构建与基因分离 基因组文库（genomic library）
按外源DNA片段的来源分基因文库分为 基因组DNA文库 从特定组织提取的染色体基因组DNA CDNA文库 mRNA反转录成的cDNA拷贝 Genomic Library Bacteria digestion Restriction digestion 8 Restriction DNA Library digestion Ligation o Bacteria Restriction Ligation mRNA CDNA 基因文库由外源DNA片段、载体和宿主组成
基因组DNA文库 从特定组织提取的染色体基因组DNA cDNA文库 mRNA反转录成的cDNA拷贝 基因文库由外源DNA片段、载体和宿主组成。 按外源DNA片段的来源分基因文库分为
构建基因文库的载体选用 载体能够容载的DNA片断大小直接影响到构建 完整的基因文库所需要的重组子的数目。 (1)对载体的要求 载体容量越大,所要求的DNA片断数目越少 所需的重组子越少。 (2)目前常用的载体 λ载体系列:容量为23kb cosmid载体:容量为45kb YAC 容量为1Mb BAC. 容量为300kb
载体能够容载的DNA片断大小直接影响到构建 完整的基因文库所需要的重组子的数目。 载体容量越大，所要求的DNA片断数目越少， 所需的重组子越少。 载体系列： 容量为 23 kb cosmid载体： 容量为 45 kb YAC： 容量为 1 Mb BAC: 容量为 300 kb 构建基因文库的载体选用 （1）对载体的要求 （2）目前常用的载体
基因组文库应满足的条件 1、文库的完整性: 文库应包含基因组的完整序列信息 2、基因组信息的可重建性: 重建基因组的完整信息 3、文库的大小: 即文库中应包含的独立重组子数目
1、文库的完整性： 文库应包含基因组的完整序列信息 2、基因组信息的可重建性： 重建基因组的完整信息 3、文库的大小： 即文库中应包含的独立重组子数目 基因组文库应满足的条件
基因组文库的大小 理论值: 基因组文库的克隆数目=基因组DNA总长 /DNA插入片段的平均长度。 例如: 细菌基因组DNA总长度=46×10kb 酶切后的DNA片段平均长度=15kb 基因组文库的克隆数=46×10kb/15kb 31×105个克隆
理论值: 基因组文库的克隆数目＝基因组DNA总长 /DNA插入片段的平均长度。 例如： 细菌基因组DNA总长度=4.6 × 106kb 酶切后的DNA片段平均长度= 15kb 基因组文库的克隆数= 4.6 × 106kb/ 15kb= 3.1 × 105个克隆 基因组文库的大小