实验三愈伤组织的诱导 、实验目的 1.巩固无菌操作技术;掌握愈伤组织的诱导培养方法;了解愈伤组织的形态特 征 2.学习愈伤组织的继代培养方法;巩固无菌操作技术;观察愈伤或培养物的再 生情况及其形态特点。 、实验原理 1.在适宜的离体培养条件下,已经分化的外植体细胞会发生脱分化而恢复其分 裂能力,形成无序生长的薄壁细胞团,即愈伤组织。培养基中的激素配比是影响 愈伤形成的关键因素。 2.愈伤在生长一段时间后,由于营养、水分减少和代谢物等积累,使其生长减 缓甚至变褐衰亡,须转接到新鲜培养基上进行继代培养或分化培养。 三、实验材料、仪器及用品 1、材料ε实验2培养的甜瓜无菌苗,每人(2人)1瓶。(或烟草苗 2、仪器及用品:超净工作台,高压灭菌锅,光照培养箱,酒精灯,小喷壶;灭 菌的不锈钢镊子、剪刀、解剖刀、培养皿各33个;灭菌蒸馏水8份;实验1配 制的愈伤组织诱导培养基每人1瓶;75%乙醇。 四、实验內容及操作方法 1)用75%酒精喷雾、擦拭超净工作台,并将除无菌苗以外的实验用具用75%乙醇 喷雾后放入超净工作台中,然后打开超净工作台风机和紫外灯,照射灭菌20min 2)在自来水管下将手洗净,然后用75%乙醇将手消毒,再进入超净工作台操作。 3)点燃酒精灯,打开已灭过菌的剪刀、镊子、解剖刀和培养皿等。 4)将培养无菌苗的三角瓶用75%酒精喷雾后放入超净工作台,在酒精灯火焰前 取下封口膜,用镊子将无菌苗夹取到培养皿中,然后剪取5-6片子叶,剪去叶边 缘,并将其剪成35mm见方的小片,最后用镊子将其接种于愈伤组织诱导培养基 上,每瓶接种8-12片
实验三 愈伤组织的诱导 一、实验目的 1．巩固无菌操作技术；掌握愈伤组织的诱导培养方法；了解愈伤组织的形态特 征。 2．学习愈伤组织的继代培养方法；巩固无菌操作技术；观察愈伤或培养物的再 生情况及其形态特点。 二、实验原理 1．在适宜的离体培养条件下，已经分化的外植体细胞会发生脱分化而恢复其分 裂能力，形成无序生长的薄壁细胞团，即愈伤组织。培养基中的激素配比是影响 愈伤形成的关键因素。 2．愈伤在生长一段时间后，由于营养、水分减少和代谢物等积累，使其生长减 缓甚至变褐衰亡，须转接到新鲜培养基上进行继代培养或分化培养。 三、实验材料、仪器及用品 1、材料：实验 2 培养的甜瓜无菌苗，每人（2 人）1 瓶。（或烟草苗） 2、仪器及用品：超净工作台，高压灭菌锅，光照培养箱，酒精灯，小喷壶；灭 菌的不锈钢镊子、剪刀、解剖刀、培养皿各 33 个；灭菌蒸馏水 8 份；实验 1 配 制的愈伤组织诱导培养基每人 1 瓶；75%乙醇。 四、实验内容及操作方法 1）用 75%酒精喷雾、擦拭超净工作台，并将除无菌苗以外的实验用具用 75%乙醇 喷雾后放入超净工作台中，然后打开超净工作台风机和紫外灯，照射灭菌 20min。 2）在自来水管下将手洗净，然后用 75%乙醇将手消毒，再进入超净工作台操作。 3） 点燃酒精灯，打开已灭过菌的剪刀、镊子、解剖刀和培养皿等。 4） 将培养无菌苗的三角瓶用 75%酒精喷雾后放入超净工作台，在酒精灯火焰前 取下封口膜，用镊子将无菌苗夹取到培养皿中，然后剪取 5-6 片子叶，剪去叶边 缘，并将其剪成 3~5mm 见方的小片，最后用镊子将其接种于愈伤组织诱导培养基 上，每瓶接种 8-12 片
5)快速封好瓶口,在瓶壁上标好姓名和接种日期。 6)将接种后的三角瓶置于25℃下暗培养一周,然后在同样温度下进行每天16h 光照和8h黑暗培养,直至愈伤组织形成。 7)将形成愈伤组织的材料进行继代培养。三角瓶用75%酒精喷雾后放入超净工 作台中,在酒精灯火焰前取下封口膜,用镊子将培养物夹取、转接到装有新鲜培 养基的三角瓶中。如果愈伤或子叶较大,或分化出根,则用镊子或剪刀将根切除, 并将愈伤切割成0.5cm见方的小块(在培养皿中进行),然后再进行转接 8)封好瓶口,标好姓名和接种日期。 9)将接种后的三角瓶置于25℃C、每天16h光照和8h黑暗条件下培养 注意事项: 1)剪切外植体时动作要快,以免造成失水而影响外植体活力。为防止失水,也 可在培养皿中滴几滴无菌水进行剪切。 2)操作时双手远离培养皿和三角瓶口,以免污染。 五、观察记载内容与实验报告 1、观察记载内容:每瓶接种数,4人小组接种总数,外植体的变化,愈伤形成 的时间、数目及其形态特征,污染情况(3天后开始观察) 2、每人接种数,4人小组接种总数;外植体/培养物的变化及其形态特征,再生 情况;污染情况等。每隔3天观察一次。 2、实验报告:每人一份。 1)实验目的 2)实验原理 3)实验方法:用流程图表示愈伤组织的培养方法。 4)实验结果与分析 A.描述愈伤的形成过程及其形态特征; B.统计愈伤诱导率与污染率,分析引起污染的原因。 C.描述培养物的变化及其形态特征 D.统计再生率与污染率,并对结果进行分析
5） 快速封好瓶口，在瓶壁上标好姓名和接种日期。 6） 将接种后的三角瓶置于 25℃下暗培养一周，然后在同样温度下进行每天 16h 光照和 8h 黑暗培养，直至愈伤组织形成。 7）将形成愈伤组织的材料进行继代培养。三角瓶用 75%酒精喷雾后放入超净工 作台中，在酒精灯火焰前取下封口膜，用镊子将培养物夹取、转接到装有新鲜培 养基的三角瓶中。如果愈伤或子叶较大，或分化出根，则用镊子或剪刀将根切除， 并将愈伤切割成 0.5 cm 见方的小块（在培养皿中进行），然后再进行转接。 8）封好瓶口，标好姓名和接种日期。 9）将接种后的三角瓶置于 25℃、每天 16 h 光照和 8 h 黑暗条件下培养。 注意事项： 1）剪切外植体时动作要快，以免造成失水而影响外植体活力。为防止失水，也 可在培养皿中滴几滴无菌水进行剪切。 2）操作时双手远离培养皿和三角瓶口，以免污染。 五、观察记载内容与实验报告 1、观察记载内容：每瓶接种数，4 人小组接种总数，外植体的变化，愈伤形成 的时间、数目及其形态特征，污染情况（3 天后开始观察）。 2、每人接种数，4 人小组接种总数；外植体/培养物的变化及其形态特征，再生 情况；污染情况等。每隔 3 天观察一次。 2、实验报告：每人一份。 1） 实验目的 2） 实验原理 3） 实验方法：用流程图表示愈伤组织的培养方法。 4） 实验结果与分析 A. 描述愈伤的形成过程及其形态特征； B. 统计愈伤诱导率与污染率，分析引起污染的原因。 C. 描述培养物的变化及其形态特征； D. 统计再生率与污染率，并对结果进行分析
再生率=分化绿芽(不定根/小植株/胚状体)的愈伤或外植体数/接种总数×100%
再生率=分化绿芽（不定根/小植株/胚状体）的愈伤或外植体数/接种总数×100%