性质: ①可以在细胞质中独立于染色体之外独立存在(游离态),也可以通过交换 掺入染色体上,以附加体(episome)的形式存在; ②质粒是一种复制子(replicon),根据自我复制能力的不同,可把质粒复 制的控制形式分为严紧型和松弛型两种,严紧型质粒的复制受细胞核控制, 与染色体DNA复制相伴随,一般一个寄主细胞内只有少数几个(1-5)个拷贝; 松弛型质粒的复制不受细胞核控制,在染色体DNA复制停止的情况下仍可以 进行复制,在细胞内的数量可以达到10-200个或更多。 ③可以通过转化、转导或接合作用而由一个细菌细胞转移到另一个菌细胞中, 使两个细胞都成为带有质粒的细胞;质粒转移时,它可以单独转移,也可以 携带着染色体(片段)一起进行转移,所以它可成为基因工程的载体。 ④对于细菌的生存并不是必要的 ⑤功能多样化 三、原核生物的质粒
性质: ①可以在细胞质中独立于染色体之外独立存在(游离态),也可以通过交换 掺入染色体上,以附加体(episome)的形式存在; ②质粒是一种复制子(replicon),根据自我复制能力的不同,可把质粒复 制的控制形式分为严紧型和松弛型两种,严紧型质粒的复制受细胞核控制, 与染色体DNA复制相伴随,一般一个寄主细胞内只有少数几个(1-5)个拷贝; 松弛型质粒的复制不受细胞核控制,在染色体DNA复制停止的情况下仍可以 进行复制,在细胞内的数量可以达到10-200个或更多。 ③可以通过转化、转导或接合作用而由一个细菌细胞转移到另一个菌细胞中, 使两个细胞都成为带有质粒的细胞;质粒转移时,它可以单独转移,也可以 携带着染色体(片段)一起进行转移,所以它可成为基因工程的载体。 ④对于细菌的生存并不是必要的 ⑤功能多样化 三、原核生物的质粒
功能:进行细胞间接合,并带有一些基因,如产生毒 素、抗药性、固氮、产生酶类、降解功能等。 重组:在质粒之间、质粒与染色体之间菌可发生。 存在范围:很多细菌如E.coli、Shigella、S.aureus、 Streptococcus lactis、根癌土壤杆菌等 制备:包括增殖、裂解细胞、分离质粒与染色体和蛋 白质等成分、去除RNA和蛋白质等步骤。 鉴定:电镜观察、电泳、密度梯度离心、限制性酶切 图谱等方法 三、原核生物的质粒
功能:进行细胞间接合,并带有一些基因,如产生毒 素、抗药性、固氮、产生酶类、降解功能等。 重组:在质粒之间、质粒与染色体之间菌可发生。 存在范围:很多细菌如E.coli、Shigella、S.aureus、 Streptococcus lactis、根癌土壤杆菌等 制备:包括增殖、裂解细胞、分离质粒与染色体和蛋 白质等成分、去除RNA和蛋白质等步骤。 鉴定:电镜观察、电泳、密度梯度离心、限制性酶切 图谱等方法 三、原核生物的质粒
2.质粒在基因工程中的应用 质粒在基因工程操作中的优点 : 1.体积小,便于DNA的分离和操作; 2.呈环状,在化学分离过程中能保持稳定性; 3.有不受核基因组控制的独立复制起始点; 4.拷贝数多,使外源DNA可快速扩增; 5.存在抗药性基因等选择性标记,便于含质粒克 隆的检出和选择
2.质粒在基因工程中的应用 质粒在基因工程操作中的优点 : 1.体积小,便于DNA的分离和操作; 2.呈环状,在化学分离过程中能保持稳定性; 3.有不受核基因组控制的独立复制起始点; 4.拷贝数多,使外源DNA可快速扩增; 5.存在抗药性基因等选择性标记,便于含质粒克 隆的检出和选择
E.Coli 的PBR322质粒
E.Coli 的PBR322质粒
E.Coli 的PBR322质粒的具体优点: 1.体积小,仅4361bp; 2.在宿主E.coli中稳定地维持高拷贝数(20-30个/细胞); 3.氯霉素抑制宿主蛋白质合成,则每个细胞可扩增到含1000 -3000个质粒; 4.分离极其容易; 5.可插入较多的外源DNA(不超过10bp); 6.结构完全清楚,各种核酸内切酶可酶解的位点可任意选用; 7.有两个选择性抗药标记(氨苄青霉素和四环素); 8.可方便地通过转化作用导入宿主细胞
E.Coli 的PBR322质粒的具体优点: 1.体积小,仅4361bp; 2.在宿主E.coli中稳定地维持高拷贝数(20-30个/细胞); 3.氯霉素抑制宿主蛋白质合成,则每个细胞可扩增到含1000 -3000个质粒; 4.分离极其容易; 5.可插入较多的外源DNA(不超过10bp); 6.结构完全清楚,各种核酸内切酶可酶解的位点可任意选用; 7.有两个选择性抗药标记(氨苄青霉素和四环素); 8.可方便地通过转化作用导入宿主细胞