二、从cDNA文库或基因组文库中分离 CDNA文库及基因组文库的构造我们将在后面讨 论,如果制备好了CDNA文库或基因组文库,那么 用原位杂交法来筛选( screening)所需要的目的基 因所在的克隆子。将这一克隆子大量繁殖,提取D NA,便可获得所需的目的基因 必要的时候还可以建立差示文库( differentia library
二、从cDNA文库或基因组文库中分离 cDNA文库及基因组文库的构造我们将在后面讨 论，如果制备好了cDNA文库或基因组文库，那么 用原位杂交法来筛选（screening）所需要的目的基 因所在的克隆子。将这一克隆子大量繁殖，提取Ｄ ＮＡ，便可获得所需的目的基因。 必要的时候还可以建立差示文库（differential library）
1. Plate with DNA-binding plasmid library filter Colonies on filter 2. Colonies are transferred to DNA-binding filter. Colonies are lysed, and DNA is denatured 3. Filter and labeled probe in solution are transferred to heat-sealed food bag. Probe hybridizes to denatured DNA of colonies
Film 4. Filter is rinsed to remove excess probe, and dried Film is applied to filter for autoradiography 5. Pick cells with plasmids that hybridized to probe. 6. Transfer cells to medium for growth, further analysis
、PCR法: PCR( polymerase chain reaction)技术是Muis于 1986年发明的一项体外快速大量扩增DNA片段的 方法(获1994年诺贝尔奖)。其基本原理就是在体 外模拟体内DNA复制的过程,在反应系统中加入 欲被扩增的DNA片段,作为模板;人工合成的寡 聚核苷酸,作为引物;耐热的DNA聚合酶(Taq) 以及四种核苷酸三磷酸。反应时,先加热至约92℃ 使模板变性。降温至约50°℃C使引物与模板结合(退 火),加温至72C,在aq酶作用下,使新DN A链延伸。重复92°C(变性)、50°C(复性) 72°C(延伸)的过程使DNA片段得到不断的扩增 可以重复几十个周期。DNA片段将2n(n为反应 周期数)的倍数增加
三、ＰＣＲ法： PCR（polymerase chain reaction)技术是Mullis于 1986年发明的一项体外快速大量扩增ＤＮＡ片段的 方法（获1994年诺贝尔奖）。其基本原理就是在体 外模拟体内DNA复制的过程，在反应系统中加入 欲被扩增的DNA片段，作为模板；人工合成的寡 聚核苷酸，作为引物；耐热的DNA聚合酶（Taq） 以及四种核苷酸三磷酸。反应时，先加热至约92℃， 使模板变性。降温至约50℃使引物与模板结合（退 火），加温至７２℃，在Taq酶作用下，使新ＤＮ Ａ链延伸。重复92℃（变性）、50℃（复性）、 72℃（延伸）的过程使ＤＮＡ片段得到不断的扩增， 可以重复几十个周期。ＤＮＡ片段将2 n（ｎ为反应 周期数）的倍数增加
Cycle T 3 5 amplified TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT3 Step 1 Denature DNA 3′step 5 a- Primers Anneal primers 5 3 Step 3 3 5 Primer extension 3 (Product of first cycle is two double stranded DNA molecules)