1、显微注射法 用玻璃显微注射器,在外科手术显微 镜下将外源DNA直接注射入靶细胞的核内。 其受体细胞主要是体积较大的受精卵细胞, 这也是转基因动物的常用方法之一
1、显微注射法: 用玻璃显微注射器,在外科手术显微 镜下将外源D NA直接注射入靶细胞的核内 。 其受体细胞主要是体积较大的受精卵细胞, 这也是转基因动物的常用方法之一
用贴塑培养的体细胞作为受体细胞, 注入核内的外源基因大约有25%整合到受 体细胞的染色体中,并稳定表达。 方法的熟练十分重要,用电脑控制 的微注射装置,每小时可注1500个细胞
用贴塑培养的体细胞作为受体细胞, 注入核内的外源基因大约有25%整合到受 体细胞的染色体中,并稳定表达。 方法的熟练十分重要,用电脑控制 的微注射装置,每小时可注1500个细胞
2、电穿孔法: 在高压电场的短暂作用下,细胞 膜上可出现可逆的孔洞,外源DNA可通 过此孔洞进入胞内。 方法适应不同细胞如细菌、酵母 植物及动物细胞。需电穿孔仪
2、电穿孔法: 在高压电场的短暂作用下,细胞 膜上可出现可逆的孔洞 ,外源D NA可通 过此孔洞进入胞内 。 方法适应不同细胞如细菌、酵母 、 植物及动物细胞。 需电穿孔仪
方法:细胞悬浮于石英池内,将外源 DNA加入到池内的介质中,池的两边有两个 电极,接高压电源。 当给予极短的高压脉冲电场时,在细 胞膜两边产生一个高于其阀电位的膜电压 势能,使细胞膜被打碎,形成许多瞬间小 孔,允许外源DNA分子进入
方法:细胞悬浮于石英池内,将外源 DNA加入到池内的介质中,池的两边有两个 电极,接高压电源。 当给予极短的高压脉冲电场时,在细 胞膜两边产生一个高于其阀电位的膜电压 势能,使细胞膜被打碎,形成许多瞬间小 孔,允许外源DNA分子进入
此法可将150kb的DNA分子转入灵长类 动物细胞。 该法简单,复制性好,效率高,尤其 是酵母细胞和细菌,远高于化学法,且转 染DNA的突变率也比化学法低。 适用于克隆基因的短暂或持续表达。 缺点:细胞损伤较大,不易成活
此法可将150kb的DNA分子转入灵长类 动物细胞。 该法简单,复制性好,效率高,尤其 是酵母细胞和细菌,远高于化学法,且转 染DNA的突变率也比化学法低。 适用于克隆基因的短暂或持续表达。 缺点:细胞损伤较大,不易成活