DNA S'END Base Phospho diester link Base Base 3'END
DNA复制发生的条件： (1)DNA聚合酶 (2)DNA模板（反转录时用RNA模板) (3)引物(RNA,提供游离3’OH) (4)4种dNTP (⑤)Mg2+ n dATP ndGTP ndCTP ndTTP 模板DNA DNA+(nl+n2+n3+n4)PPi DNA聚合酶 Mg2+
⑴ DNA聚合酶 ⑵ DNA模板（反转录时用RNA模板） ⑶ 引物（RNA，提供游离3’-OH） ⑷ 4种dNTP ⑸ Mg2+ DNA复制发生的条件： n1 dATP + n2 dGTP + n3 dCTP + n4 dTTP DNA +（n1+n2+n3+n4）PPi 模板DNA Mg2+ DNA聚合酶
3 原核生物的酶类 (1)、DNA聚合酶 (DNA polymerases) 。 在大肠杆菌中发现了三种DNA聚合酶 DNA聚合酶I: 主要功能是参与DNA修复，切除RNA引物。 DNA聚合酶Ⅱ： 主要功能是参与DNA的损伤修复。 DNA聚合酶Ⅲ（寡聚酶)： DNA聚合酶Ⅲ才是催化大肠杆菌DNA复制主 要的酶
3 原核生物的酶类 • 在大肠杆菌中发现了三种DNA聚合酶 • DNA聚合酶I： • 主要功能是参与DNA修复，切除RNA引物。 • DNA聚合酶Ⅱ： • 主要功能是参与DNA的损伤修复。 • DNA聚合酶Ⅲ（寡聚酶）： • DNA聚合酶Ⅲ才是催化大肠杆菌DNA复制主 要的酶。 (1)、DNA聚合酶（DNA polymerases）
Structure of the Klenow fragment The polymerase of DNA polyme domain The 3 to 5 exonuclease domain
Structure of the Klenow fragment of DNA polymease I The polymerase domain The 3` to 5` exonuclease domain
DNA聚合酶I ①5→3聚合酶活性：是一个模板指导酶；只能将 脱氧核苷酸加于已存在的DNA或RNA链的3-OH上， 缺少不能合成。 ②3→5外切酶活性：只对单链，起校对功能。 ③5”→3外切酶活性：对双链，损伤修复作用，及 切除RNA引物并填补其留下的缺口。 大片断（68000u,Klenow):3'→5'外切酶活性、 5→3聚合酶活性 小片断：5′→3外切酶活性
DNA聚合酶Ⅰ ① 5´→ 3´聚合酶活性：是一个模板指导酶；只能将 脱氧核苷酸加于已存在的DNA或RNA链的3 ´-OH 上， 缺少不能合成。 ② 3´→ 5´外切酶活性：只对单链，起校对功能。 ③ 5´→ 3´外切酶活性：对双链，损伤修复作用，及 切除RNA引物并填补其留下的缺口。 大片断（68000u，Klenow）: 3´→ 5´外切酶活性、 5´→ 3´聚 合酶活性 小片断: 5´→ 3´外切酶活性