核酸分子杂交实验包括如下两个步骤: 将核酸样品转移到固体支持物滤膜上,这 个过程特称为核酸印迹( nucleic acid blotting)转移,主要有电泳凝胶核酸印迹法、 斑点和狭线印迹法( dot and slot blotting) 菌落和噬菌斑印迹法( colony and plaque blotting); 将具有核酸印迹的滤膜同带有放射性标记 或其它标记的DNA或RNA探针进行杂交。 所以有时也称这类核酸杂交为印迹杂交
核酸分子杂交实验包括如下两个步骤： 将核酸样品转移到固体支持物滤膜上，这 个过程特称为核酸印迹(nucleic acid blotting)转移，主要有电泳凝胶核酸印迹法、 斑点和狭线印迹法(dot and slot blotting)、 菌落和噬菌斑印迹法(colony and plaque blotting)； 将具有核酸印迹的滤膜同带有放射性标记 或其它标记的DNA或RNA探针进行杂交。 所以有时也称这类核酸杂交为印迹杂交
DNA限制片段 含有EB染料 的琼糖凝胶 基因组DNA 标准分子量DNA 玻璃板 吸引滤纸 高盐缓冲 硝酸纤维素滤膜 同探针同源杂交 基因DNA片段
保留 生长着转化菌落的平板 原盘 硝酸纤维素滤膜 平 溶菌碱变性酸中和洗去细胞碎片 置于溶菌液中的滤膜 挑取阳性菌落 烤干 杂交 放射自显影 显示阳性菌落斑点的X光底片 具DNA印迹的滤膜 图26检测重组体克隆的菌落杂交技术
Color- or fluorescence Colored or producing substrate rescent pro Alkaline phosphatase Streptavidin Biotin Biotinylated probe Target mIor OMOM Fig 9-2
3.细菌的转化 所谓细菌转化,是指一种细菌菌株由于捕获了来 自另一种细菌菌株的DNA,而导致性状特征发生 遗传改变的生命过程。这种提供转化DNA的菌株 叫做供体菌株,而接受转化DNA的寄主菌株则称 做受体菌株。大肠杆菌是最广泛使用的实验菌株 在加入转化DNA之前,必须预先用CaC2处理大 肠杆菌细胞,使之呈感受态( Competent Cells)。 Mg2+对维持外源DNA的稳定性起重要作用,质粒 DNA中的抗生素是筛选标记。 对绝大多数hsdR-,hsdM-突变体菌株(k12) 每 ug DNA可得107-108个转化子
3． 细菌的转化 所谓细菌转化，是指一种细菌菌株由于捕获了来 自另一种细菌菌株的DNA，而导致性状特征发生 遗传改变的生命过程。这种提供转化DNA的菌株 叫做供体菌株，而接受转化DNA的寄主菌株则称 做受体菌株。大肠杆菌是最广泛使用的实验菌株。 在加入转化DNA之前，必须预先用CaCl2处理大 肠杆菌细胞，使之呈感受态（Competent Cells）。 Mg2+对维持外源DNA的稳定性起重要作用，质粒 DNA中的抗生素是筛选标记。 对绝大多数hsdR-，hsdM-突变体菌株（k12）， 每ug DNA可得107-108个转化子