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基因操作的主要技术原理 1.核酸的凝胶电泳( Agarose& Polyacrylamide) 将某种分子放到特定的电场中,它就会以一定的 速度向适当的电极移动。某物质在电场作用下的迁 移速度叫作电泳的速率,它与电场强度成正比,与 该分子所携带的净电荷薮成正比,而与分子的磨擦 系数成反比(分子大小、极性、介质的粘度系数 等)。 在生理条件下,核酸分子中的磷酸基团是离子化 的,所以,DNA和RNA实际上呈多聚阴离子状态 ( Polyanions)。将DNA、RNA放到电场中,它就 会由负极→正极移动
二、 基因操作的主要技术原理 1． 核酸的凝胶电泳(Agarose & Polyacrylamide) ▪ 将某种分子放到特定的电场中，它就会以一定的 速度向适当的电极移动。某物质在电场作用下的迁 移速度叫作电泳的速率，它与电场强度成正比，与 该分子所携带的净电荷数成正比，而与分子的磨擦 系数成反比（分子大小、极性、介质的粘度系数 等）。 ▪ 在生理条件下，核酸分子中的磷酸基团是离子化 的，所以，DNA和RNA实际上呈多聚阴离子状态 （Polyanions）。将DNA、RNA放到电场中，它就 会由负极→正极移动
Agarose的分离范围在50bp-数十kb (40%)(0.3%) Polyacrylamide(page), 1--1000bpl (20%)(4) 表21琼脂糖及聚丙烯酰胺凝胶分辨DNA片段的能力 凝胶类型及浓度 分离DNA片段的大小范围(bp) 0.3%琼脂糖 50000~1000 0.7%琼脂糖 20000~1000 1.4%琼脂糖 6000~300 4.0%聚丙烯酰胺 1000~100 10.0%聚丙烯酰胺 500~25 20.0%聚丙烯酰胺 50~1
在凝胶电泳中,一般加入溴化乙锭(EB)- ethidium bromide染色,此时,核酸分子 在紫外光下发出荧光,肉眼能看到约50ng DNA所形成的条带 DNA的脉冲电泳技术:PFGE-Puse-fied gel electrophoresis
▪ 在凝胶电泳中，一般加入溴化乙锭（EB）- -ethidium bromide染色，此时，核酸分子 在紫外光下发出荧光，肉眼能看到约50ng DNA所形成的条带。 ▪ DNA的脉冲电泳技术 :PFGE-Pulse-field gel electrophoresis
2.核酸的分子杂交技术 在大多数核酸杂交反应中,经过凝胶电泳 分离的DNA或RNA分子,都是在杂交之前, 通过毛细管作用或电导作用按其在凝胶中 的位置原封不动地"吸印"转移到滤膜上的 常用的滤膜有尼龙滤膜、硝酸纤维素滤膜, 叠氮苯氧甲基纤维素滤纸(DBM)和二乙 氨基乙基纤维素滤膜(DEAE)
2． 核酸的分子杂交技术 在大多数核酸杂交反应中，经过凝胶电泳 分离的DNA或RNA分子，都是在杂交之前， 通过毛细管作用或电导作用按其在凝胶中 的位置原封不动地"吸印" 转移到滤膜上的。 常用的滤膜有尼龙滤膜、硝酸纤维素滤膜， 叠氮苯氧甲基纤维素滤纸（DBM）和二乙 氨基乙基纤维素滤膜（DEAE）