2、离子对苯取比色法 (1)酸性染料比色法:在一定pH的介质中,生物碱B与氢离子 H结合成盐BH),与某些酸性染料的阴离孑In结合成有色化 合物[BHIn],它能定量的被有机溶剂提取出来,此结合物碱 化或酸化后,即定量放出染料可进行比色,或测定该有色的有 机溶液。 此方法的关键:选择合适的pH、合适的酸性染料和合适的有 机溶剂。含有1个N原子的生物碱与酸性染料溴酚蓝)生成分子 1:l的结合物,与2个N原子的生物碱生成分子1:2的结合物 pH应较低pH3.0~58)。此外,应防止操作时混入水分。同 时也须注意带入水相中过量染料影响测定的结果 例风湿骨痛胶囊中乌头总生物碱的含量测定
21 2、离子对萃取比色法 (1)酸性染料比色法：在一定pH的介质中，生物碱B与氢离子 H+结合成盐(BH+)，与某些酸性染料的阴离子In-结合成有色化 合物[BH+In- ]，它能定量的被有机溶剂提取出来，此结合物碱 化或酸化后，即定量放出染料可进行比色，或测定该有色的有 机溶液。 此方法的关键：选择合适的pH、合适的酸性染料和合适的有 机溶剂。含有1个N原子的生物碱与酸性染料(溴酚蓝)生成分子 1∶l的结合物，与2个N原子的生物碱生成分子1∶2的结合物 (pH应较低pH3.0 ～5.8)。此外，应防止操作时混入水分。同 时也须注意带入水相中过量染料影响测定的结果。 例 风湿骨痛胶囊中乌头总生物碱的含量测定
(2)苦味酸盐比色法 利用在弱酸性或中性溶液中生物碱可与苦味酸定量生成苦味 酸盐沉淀,该沉淀可溶于氯仿等有机溶剂,也可在碱性条件下 解离释放出生物碱和苦味酸来进行含量测定 方法一:滤取生物碱苦味酸盐沉淀,洗去多余试剂,加碱使 沉淀解离,以有机溶剂萃取游离岀的生物碱,用含有苦味酸的 碱性水溶液进行比色测定,再换算出生物碱的含量; 方法二:直接在pH4~5的缓冲溶液中加氯仿提取生物碱苦 味酸盐,氯仿液在360nm直接比色测定;
22 (2)苦味酸盐比色法 利用在弱酸性或中性溶液中生物碱可与苦味酸定量生成苦味 酸盐沉淀，该沉淀可溶于氯仿等有机溶剂，也可在碱性条件下 解离释放出生物碱和苦味酸来进行含量测定。 方法一：滤取生物碱苦味酸盐沉淀，洗去多余试剂，加碱使 沉淀解离，以有机溶剂萃取游离出的生物碱，用含有苦味酸的 碱性水溶液进行比色测定，再换算出生物碱的含量； 方法二：直接在pH4～5的缓冲溶液中加氯仿提取生物碱苦 味酸盐，氯仿液在360nm直接比色测定；
方法三:在pH为7的缓冲液中加试剂,使生物碱与苦味酸 成盐,用氯仿提取该盐,再用pH11的缓冲溶液使其溶解, 苦味酸转溶到碱水液中进行比色,再换算出生物碱的含量。 例万氏牛黄清心丸中黄连总季铵碱的测定 中国药典(2000年版),采用方法二 中国药典(2005年版),采用薄层色谱法测盐酸小檗碱 的含量
23 方法三：在pH为7的缓冲液中加试剂，使生物碱与苦味酸 成盐，用氯仿提取该盐，再用pH11的缓冲溶液使其溶解， 苦味酸转溶到碱水液中进行比色，再换算出生物碱的含量。 例 万氏牛黄清心丸中黄连总季铵碱的测定 中国药典（2000年版），采用方法二 中国药典（2005年版），采用薄层色谱法测盐酸小檗碱 的含量
(3)雷氏盐比色法: 生物碱雷氏盐沉淀,易溶于丙酮,可直接比色测定吸收度, 换算生物碱的含量。而其丙酮溶液所呈现的吸收特征,是由于 分孑结构中的硫代氰酸铬铵部分,而不是结合的生物碱部分, 其吸收值与样品或溶剂无关。硫代氰酸铬铵在丙酮中的克分子 吸收系数为1065(单盐。故可根据其吸收值A按下式直接测得 样品重而不需绘制标准曲线 W=(AE)×M×v/1000 本方法可不需要标准对照品,但需注意生物碱生成单盐或双 盐,并要注意样品的净化。 例产妇康颗粒中益母草总生物碱的含量测定 24
24 (3)雷氏盐比色法： 生物碱雷氏盐沉淀，易溶于丙酮，可直接比色测定吸收度， 换算生物碱的含量。而其丙酮溶液所呈现的吸收特征，是由于 分子结构中的硫代氰酸铬铵部分，而不是结合的生物碱部分， 其吸收值与样品或溶剂无关。硫代氰酸铬铵在丙酮中的克分子 吸收系数为106.5(单盐)。故可根据其吸收值A按下式直接测得 样品重而不需绘制标准曲线。 W =（ A/ε）×M×V/1000 本方法可不需要标准对照品，但需注意生物碱生成单盐或双 盐，并要注意样品的净化。 例 产妇康颗粒中益母草总生物碱的含量测定
(3)异羟肟酸铁比色法 含有酯键结构的生物碱,在碱性介质中加热时酯鍵水解, 产生的羧基与羟胺反应生成异羟肟酸,与高铁离子生成紫红 色配位化合物,可用比色法测其含量
25 (3)异羟肟酸铁比色法 含有酯键结构的生物碱，在碱性介质中加热时酯键水解， 产生的羧基与羟胺反应生成异羟肟酸，与高铁离子生成紫红 色配位化合物，可用比色法测其含量