图2-3用核孔滤器过滤得到的水生细菌和藻类的电镜照片，孔的大小是5um。加入特灭菌的培养基漏斗手持夹滤膜一玻璃座抽真空底橡皮塞无菌培养基(a).b)图2-3膜滤器。（a）可反复使用的膜过滤装置。（b）已组装好的膜过滤装置。左侧：液体的过滤灭菌系统。右侧：大量液体的过滤灭菌系统。三、材料、试剂与器具16
16 三、材料、试剂与器具 图 2-3 膜滤器。（a）可反复使用的膜过滤装置。（b）已组装好的膜过滤装置。 左侧：液体的过滤灭菌系统。 右侧：大量液体的过滤灭菌系统。 图 2-3 用核孔滤器过滤得到的水生细菌和藻类的电镜照片，孔的大小是 5μm
1、材料2%葡萄糖溶液，肉汤蛋白陈平板培养基。2、器具注射器，微孔滤膜过滤器，0.22μm滤膜，无菌试管，镊子，玻璃刮。四、操作步骤1.组装、灭菌将0.22um孔径的滤膜装入清洗干净的塑料滤器中，旋紧压平，包装灭菌后待用（0.1Mpa，121.5℃灭菌20min）。2.连接将灭菌滤器的入口在无菌条件下，以无菌操作方式连接于装有待过滤溶液（2%葡萄糖溶液）的注射器上，将针头与出口处连接并插入带橡皮塞的无菌试管中。见图2-3b（左）。3.压滤将注射器中的待滤溶液加压缓缓挤入过滤到无菌试管中，滤毕，将针头拨出。4.无菌检查无菌操作吸取除菌滤液0.1mL于肉汤蛋白陈平板上，用玻璃刮涂布均匀，置37℃温室中培养24h，检查是否有菌生长。若发现有菌生长，要重新过滤一次，再进行检查是否有菌生长。5.清洗弃去塑料滤器上的微孔滤膜，将塑料滤器清洗干净，并换上一张新的微孔滤膜，组装包扎，再经灭菌后使用。五、注意事项1.压滤时，用力要适当，不可太猛太快，以免细菌被挤压通过滤膜淀胶。2.整个过程应在无菌条件下严格无菌操作，以防污染，过滤时应避免各连接处出现渗漏现象。3.装滤膜时要小心细致，装得平整。六、实验报告记录无菌检查结果七、思考题1、你做的过滤除菌实验效果如何？如果经培养检查有杂菌生长，你认为是什么原因造成的？2、如果你需要配制一种含有某抗生素的牛肉膏蛋白陈培养基，其抗生素的浓渡（或工作浓度）为50μg/mL，你将如何操作？3、过滤除菌应注意哪些问题？17
17 1、 材料 2%葡萄糖溶液，肉汤蛋白胨平板培养基。 2、器具 注射器，微孔滤膜过滤器，0.22μm 滤膜，无菌试管，镊子，玻璃刮。 四、操作步骤 1．组装、灭菌 将 0.22μm 孔径的滤膜装入清洗干净的塑料滤器中，旋紧压平，包装灭菌后待用 （0.1Mpa, 121.5℃灭菌 20min）。 2．连接 将灭菌滤器的入口在无菌条件下，以无菌操作方式连接于装有待过滤溶液（2%葡萄 糖溶液）的注射器上，将针头与出口处连接并插入带橡皮塞的无菌试管中。见图 2-3b（左）。 3．压滤 将注射器中的待滤溶液加压缓缓挤入过滤到无菌试管中，滤毕，将针头拨出。 4．无菌检查 无菌操作吸取除菌滤液 0.1mL 于肉汤蛋白胨平板上，用玻璃刮涂布均匀，置 37℃温 室中培养 24h，检查是否有菌生长。若发现有菌生长，要重新过滤一次，再进行检查是否 有菌生长。 5．清洗 弃去塑料滤器上的微孔滤膜，将塑料滤器清洗干净，并换上一张新的微孔滤膜，组 装包扎，再经灭菌后使用。 五、注意事项 1．压滤时，用力要适当，不可太猛太快，以免细菌被挤压通过滤膜淀胶。 2．整个过程应在无菌条件下严格无菌操作，以防污染，过滤时应避免各连接处出现 渗漏现象。 3．装滤膜时要小心细致，装得平整。 六、实验报告 记录无菌检查结果 七、思考题 1、你做的过滤除菌实验效果如何？如果经培养检查有杂菌生长，你认为是什么原因 造成的？ 2、如果你需要配制一种含有某抗生素的牛肉膏蛋白胨培养基，其抗生素的浓渡（或 工作浓度）为 50μg/mL，你将如何操作？ 3、过滤除菌应注意哪些问题？
实验3微生物的接种技术一、目的微生物接种技术就是在灭菌条件下，用接种工具（针、环）从一支原菌种中挑取少许菌体，接入到另一支新的培养基上进扩大培养的技术。了解学习灭菌操作技术：掌握斜面接种技术。二、原理接种就是在灭菌条件下，用接种工具（针、环）（如图3-1）从一支原菌种中挑取少许菌体，接入到另一支新的培养基上进扩大培养的技术。接种就是在灭菌条件下，用接种工具（针、环）从一支原菌种中挑取少许菌体，接入到另一支新的培养基上进扩大培养的技术。我们要想得到大量的菌种，适应生产，科研和教学要求，就要进行微生物的接种，扩大菌种数量。接种因使用不同容器、不同的培养基，达到不同的目的，而有不同的接种方法，但是它们的基本要求是相同的。通常接种都应在空气经过消毒灭菌过的“接种室”、或接种箱或超净工作台内进行。三、材料、试剂与器具1.材料苏云金杆菌斜面菌种，牛肉膏蛋白陈斜面培养基。2.试剂75%酒精或1：50的新法尔天水溶液。3.超净工作台，接种针（环），接种工具（如图3-1）、酒精灯等。四、操作步骤EFABCD（一）准备工作图3-1接种工具1.接种或接种室使用前半天先擦洗干净，然后A接种环：B.接种针：C.接种钧每立方米体积用5~10毫升福尔马林盛在容器中加D.接种铲：E.F.玻璃涂布器热熏蒸或者是用1/10的福尔马林重量的高锰酸钾加到盛有福尔马林的容器中，不用加热，亦可进行熏蒸：也可用5%的石炭酸喷务灭菌：用紫外灯照射20~30min。也可达到灭菌的目的。应注意，要把接种时要所需的用具（如接种针（环），酒精灯等）及培养基放入接种箱（室）一起灭菌消毒，但是菌种不能放入，以免死。超净工作要预先通风，紫外线照射30min方可使用。2.进入接种室前先把手洗净，再用75%酒精或新洁尔灭擦两手，菌种试管表面同样18
18 实验 3 微生物的接种技术 一、目的 微生物接种技术就是在灭菌条件下，用接种工具（针、环）从一支原菌种中挑取少 许菌体，接入到另一支新的培养基上进扩大培养的技术。 了解学习灭菌操作技术；掌握斜面接种技术。 二、原理 接种就是在灭菌条件下，用接种工具（针、环）（如图 3-1）从一支原菌种中挑取少 许菌体，接入到另一支新的培养基上进扩大培养的技术。接种就是在灭菌条件下，用接种 工具（针、环）从一支原菌种中挑取少许菌体，接入到另一支新的培养基上进扩大培养的 技术。 我们要想得到大量的菌种，适应生产，科研和教学要求，就要进行微生物的接种， 扩大菌种数量。接种因使用不同容器、不同的培养基，达到不同的目的，而有不同的接种 方法，但是它们的基本要求是相同的。通常接种都应在空气经过消毒灭菌过的“接种室”、 或接种箱或超净工作台内进行。 三、材料、试剂与器具 1． 材料 苏云金杆菌斜面菌种，牛肉膏蛋白胨 斜面培养基。 2． 试剂 75%酒精或 1：50 的新法尔天水溶液。 3． 超净工作台，接种针（环），接种工具（如图 3-1）、酒精灯等。 四、操作步骤 （一）准备工作 1．接种或接种室使用前半天先擦洗干净，然后 每立方米体积用 5~10 毫升福尔马林盛在容器中加 热熏蒸或者是用1/10的福尔马林重量的高锰酸钾加 到盛有福尔马林的容器中，不用加热，亦可进行熏蒸；也可用 5%的石炭酸喷务灭菌；用 紫外灯照射 20~30min。也可达到灭菌的目的。应注意，要把接种时要所需的用具（如接 种针（环），酒精灯等）及培养基放入接种箱（室）一起灭菌消毒，但是菌种不能放入， 以免死。超净工作要预先通风，紫外线照射 30min 方可使用。 2．进入接种室前先把手洗净，再用 75%酒精或新洁尔灭擦两手，菌种试管表面同样 图 3-1 接种工具 A. 接种环；B.接种针；C.接种钩； D.接种铲；E.F.玻璃涂布器
要用酒精或新洁尔灭抹擦后才放入接种室（箱内）。（二）接种技术1、斜面菌种接种技术（从斜面培养基上的菌种接种至另一新的斜面培养基上的方法）。（1）准备工作就绪后，点然酒精灯。（2）将菌种和斜面培养基的两支试管用大拇指和其他四指握在左手中，使中指拉于两试管之间的部分，斜面向上，并使它们拉于水平位置，也可将试管放在左手掌中，用手指托住试管。（3）先将棉塞用右手拧转松动，便以接种时拔出。（4）右手拿接种环（拿的方法就和拿钢笔一样），在火焰上将环的部分烧红灭菌。(t)(2)(3)(4)(5)(6)图3-2斜面接种时的无菌择作(1)接种灭菌（2)启开鼎塞（3)管口天菌（4)挑取菌首（5）接种6）塞上棉塞环以上凡是在接种时可能进入试管的部分，均应用火烧过（如图3-2）。以下操作都要把试管口靠近火焰旁进行。（5）用右手小指、无名指和手掌拔掉棉塞（如图3-2）。（6）用火焰灼烧管口，灼烧时应不断转动试管口（靠手腕的动作，使试管口沾染的小量菌得以烧死）。（如图3-2）。（7）将烧过的接种针（环）触动没有长菌的培养基部分，使其冷却，以免烧死被接19
19 要用酒精或新洁尔灭抹擦后才放入接种室（箱内）。 （二）接种技术 1、斜面菌种接种技术（从斜面培养基上的菌种接种至另一新的斜面培养基上的方法）。 （1）准备工作就绪后，点然酒精灯。 （2）将菌种和斜面培养基的两支试管用大拇指和其他四指握在左手中，使中指拉于 两试管之间的部分，斜面向上，并使它们拉于水平位置，也可将试管放在左手掌中，用手 指托住试管。 （3）先将棉塞用右手拧转松动，便以接种时拔出。 （4）右手拿接种环（拿的方法就和拿钢笔一样），在火焰上将环的部分烧红灭菌。 环以上凡是在接种时可能进入试管的部分，均应用火烧过（如图 3-2）。 以下操作都要把试管口靠近火焰旁进行。 （5）用右手小指、无名指和手掌拔掉棉塞（如图 3-2）。 （6）用火焰灼烧管口，灼烧时应不断转动试管口（靠手腕的动作，使试管口沾染的 小量菌得以烧死）。（如图 3-2）。 （7）将烧过的接种针（环）触动没有长菌的培养基部分，使其冷却，以免烧死被接
种的菌体，然后轻轻接触菌体，取出少许，慢慢将接种针（环）抽出试管（如图3-2）。（8）迅速将接种针（环）在火焰旁无菌区伸进另一试管，在培养基斜面上轻轻划线，在上面接细菌，划线时要由底部划到顶部，由而上，划线可划之字形，或划儿条直线但都不要把培养基划破，也不要使菌种沾污管壁（如图3-2）。（9）将接种针（环）抽出，灼烧试管口，并在火焰旁将棉塞塞上。塞棉塞时，不要用试管去迎棉塞，以免试管在运动时纳入不洁空气（如图3-2）。（10）把针（环）在火焰上再灼红灭菌，放下接种钟（环）后，再腾出手来将塞塞紧。（如图3-2）。（11）全部培养基接种完毕后，要将试管斜面培养基包扎好，并标明姓名、时间和菌种名称：整理好接种室（箱）的台面，搞好清洁卫生。2、液体接种技术（由斜面菌接入液体培养基内或液体菌种接入液体培养基）（1）准备工作和操作方法与前相同，但可使试管向上略斜，以免培养液流出。（2）将取得菌种的接种环送入液体培养基时，可使环在液体表面与管壁接触的部分轻轻摩擦。接种后塞棉塞，将试管在手掌中轻轻摇动，使菌体在培养基中分散开来。（3）由液体菌种接种液体培养基时，接种用无菌滴管或移液管，接种量通常为培养液体积的1/10。无菌操作的注意事项与前相同，只是移液管不同于接种针，系由玻璃做成，它不能在火焰上购烧，接种前在火焰上迅速通过一两次即可。3、穿刺接种技术（深层柱形固体培养基的接种技术）（如图3-3）（1）取两支新鲜半固体牛肉膏蛋白陈深层柱状培养基，做好标记（写上菌种名、接种日期和接种人等）。（2）接种的方法是，用接种针沾取少量待接菌种，然后从柱状培养基的表面中心穿入其底部（但不要穿透），然后沿原刺入路线抽出接种针，注意接种针不要移动。以上接好种的材料置于30℃下培养24~48h。五、注意事项1、菌种取出后，接种针（环）不要通过火焰、以免烧死菌体。2、斜面接种时，不要使接种针（环）的碰到管壁；不要划破培养基，但也不能在试管空间划，一定要接触到斜面表面上划线接种。3、接种前的准备和接种过程都要有无菌概念。六、实验报告培养后取出试管，观察划线接种效果、菌种生长情况，检查是否有杂菌生长，评价无菌操作的效果。七、思考题微生物接种时，通过哪些措施可防止杂菌污染？20
20 种的菌体，然后轻轻接触菌体，取出少许，慢慢将接种针（环）抽出试管（如图 3-2）。 （8）迅速将接种针（环）在火焰旁无菌区伸进另一试管，在培养基斜面上轻轻划线， 在上面接细菌，划线时要由底部划到顶部，由上而上，划线可划之字形，或划几条直线， 但都不要把培养基划破，也不要使菌种沾污管壁（如图 3-2）。 （9）将接种针（环）抽出，灼烧试管口，并在火焰旁将棉塞塞上。塞棉塞时，不要 用试管去迎棉塞，以免试管在运动时纳入不洁空气（如图 3-2）。 （10）.把针（环）在火焰上再灼红灭菌，放下接种钟（环）后，再腾出手来将塞塞 紧。（如图 3-2）。 （11）全部培养基接种完毕后，要将试管斜面培养基包扎好，并标明姓名、时间和 菌种名称；整理好接种室（箱）的台面，搞好清洁卫生。 2、液体接种技术（由斜面菌接入液体培养基内或液体菌种接入液体培养基） （1）准备工作和操作方法与前相同，但可使试管向上略斜，以免培养液流出。 （2）将取得菌种的接种环送入液体培养基时，可使环在液体表面与管壁接触的部分 轻轻摩擦。接种后塞棉塞，将试管在手掌中轻轻摇动，使菌体在培养基中分散开来。 （3）由液体菌种接种液体培养基时，接种用无菌滴管或移液管，接种量通常为培养 液体积的 1/10。无菌操作的注意事项与前相同，只是移液管不同于接种针，系由玻璃做 成，它不能在火焰上灼烧，接种前在火焰上迅速通过一两次即可。 3、穿刺接种技术（深层柱形固体培养基的接种技术）（如图 3-3） （1）取两支新鲜半固体牛肉膏蛋白胨深层柱状培养基，做好标记（写上菌种名、接 种日期和接种人等）。 （2）接种的方法是，用接种针沾取少量待接菌种，然后从柱状培养基的表面中心穿 入其底部（但不要穿透），然后沿原刺入路线抽出接种针，注意接种针不要移动。 以上接好种的材料置于 30℃下培养 24~48h。 五、注意事项 1、菌种取出后，接种针（环）不要通过火焰、以免烧死菌体。 2、斜面接种时，不要使接种针（环）的碰到管壁；不要划破培养基，但也不能在试 管空间划，一定要接触到斜面表面上划线接种。 3、接种前的准备和接种过程都要有无菌概念。 六、实验报告 培养后取出试管，观察划线接种效果、菌种生长情况，检查是否有杂菌生长，评价 无菌操作的效果。 七、思考题 微生物接种时，通过哪些措施可防止杂菌污染？