微生物学实验指导黄文芳张松编著华南师范大学生命科学学院
1 微生物学实验指导 黄文芳 张 松 编著 华南师范大学生命科学学院
目录基础实验实验1培养基的配制·实验2消毒与灭菌·.5实验3微生物的接种技术.-13实验4微生物分离与纯化技术….....16实验5圆褐固氮菌的分离、纯化与测定.19实验6-22从病鱼体上分离、纯化病原菌实验7-24噬菌体分离、纯化与效价的测定.实验8各种微生物菌落形态的观察.30实验9细菌个体形态的观察.34实验10细菌细胞单染色观察…...36实验11细菌的革兰氏染色.·39实验12细菌鞭毛染色与观察..42实验13细菌芽孢染色与观察*45实验14细菌荚膜染色与观察·47实验15放线菌的形态观察·.49实验16酵母菌的形态观察..51实验 17霉菌的形态观察·54附在中学生物学教学中，如何观察微生物…·57实验18细菌和酵母菌体大小的测量.·59实验19微生物数量的测定..63实验20细菌生理生化反应试验·.·...73实验21多项微量生化反应快速鉴定技术86实验22氧影响微生物生长的试验·.·90实验23厌氧微生物的培养952
2 目 录 基础实验 实验 1 培养基的配制.1 实验 2 消毒与灭菌.5 实验 3 微生物的接种技术.13 实验 4 微生物分离与纯化技术.16 实验 5 圆褐固氮菌的分离、纯化与测定.19 实验 6 从病鱼体上分离、纯化病原菌.22 实验 7 噬菌体分离、纯化与效价的测定.24 实验 8 各种微生物菌落形态的观察.30 实验 9 细菌个体形态的观察.34 实验 10 细菌细胞单染色观察.36 实验 11 细菌的革兰氏染色.39 实验 12 细菌鞭毛染色与观察.42 实验 13 细菌芽孢染色与观察.45 实验 14 细菌荚膜染色与观察.47 实验 15 放线菌的形态观察.49 实验 16 酵母菌的形态观察.51 实验 17 霉菌的形态观察.54 附：在中学生物学教学中，如何观察微生物.57 实验 18 细菌和酵母菌体大小的测量.59 实验 19 微生物数量的测定.63 实验 20 细菌生理生化反应试验.73 实验 21 多项微量生化反应快速鉴定技术.86 实验 22 氧影响微生物生长的试验.90 实验 23 厌氧微生物的培养.95
实验24温度影响微生物生长的试验·100实验25不同NaC1浓度影响微生物生长的试验.·102实验26pH影响微生物生长的试验104实验27不同碳源物质对微生物培养生长的影响，106实验28108微生物菌种保藏·实验29免疫血清的制备·.110实验30凝集反应··113实验31沉淀反应··116综合实验实验32·119水中细菌学检查·1...119水中细菌总数的测定.II水中大肠菌群的检测·123实验33酒精发酵及糯米甜酒的酿制·128实验34高淀粉酶活性枯草芽孢杆菌菌株的筛选与育种技术.130实验35食用菌培养1353
3 实验 24 温度影响微生物生长的试验.100 实验 25 不同 NaCl 浓度影响微生物生长的试验.102 实验 26 pH 影响微生物生长的试验.104 实验 27 不同碳源物质对微生物培养生长的影响.106 实验 28 微生物菌种保藏.108 实验 29 免疫血清的制备.110 实验 30 凝集反应.113 实验 31 沉淀反应.116 综合实验 实验 32 水中细菌学检查.119 I 水中细菌总数的测定.119 I I 水中大肠菌群的检测 . . . . . . . . . . .123 实验 33 酒精发酵及糯米甜酒的酿制.128 实验 34 高淀粉酶活性枯草芽孢杆菌菌株的筛选与育种技术.130 实验 35 食用菌培养. 135
基础实验实验1培养基的配制一、目的学习和掌握培养基配制的一般方法和步骤。二、原理由人工配制供给微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的营养基质，称之为培养基。培养基中含有氮素、碳素、矿质元素、生长因子、水等物质，可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。三、材料、试剂与器具1、材料牛肉膏，蛋白陈，琼脂，可溶性淀粉，葡萄糖，孟加拉红，链霉素。2、试剂1mol/LNaOH，1mol/LHCI，KNO3，NaCl，K2HPO47H2OFeSO4-7H2O,CaSO4-2H2O,CaCO,等3、器具试管，三角瓶，瓷量杯，量筒，玻璃棒，天平，牛角匙，pH试纸，棉花，牛皮纸，记号笔，线绳，纱布，漏斗，漏斗架，胶管，止水夹等。四、操作步骤（一）牛肉膏蛋白陈固体培养基的配制牛肉膏蛋白陈培养基是一种适合许多细菌生长的最普通的细菌基础培养基。其配方如下：牛肉膏5g，蛋白陈10g，NaC15g，琼脂15~20g，水1000mL，pH7.4~7.61、称药品按实际用量计算后，按配方称取各种药品入瓷杯中。牛肉膏可放在称量纸上称量，随后放入热水中，牛肉膏溶解后，立即取出纸片。2、加热溶解在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入已溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分。4
4 基础实验 实验 1 培养基的配制 一、目的 学习和掌握培养基配制的一般方法和步骤。 二、原理 由人工配制供给微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的营养基质，称之为培养基。 培养基中含有氮素、碳素、矿质元素、生长因子、水等物质，可分为固体培养基、液 体培养基和半固体培养基。 三、材料、试剂与器具 1、材料 牛肉膏,蛋白胨，琼脂，可溶性淀粉，葡萄糖，孟加拉红， 链霉素。 2、 试剂 1mol/L NaOH，1mol/L HCI，KNO3，NaCl，K2HPO4·7H2O， FeSO4·7H2O，CaSO4·2H2O,CaCO3 等 3、 器具 试管，三角瓶，瓷量杯，量筒，玻璃棒，天平，牛角匙，pH 试纸，棉花， 牛皮纸，记号笔，线绳，纱布，漏斗，漏斗架，胶管，止水夹等。 四、操作步骤 （一） 牛肉膏蛋白胨固体培养基的配制 牛肉膏蛋白胨培养基是一种适合许多细菌生长的最普通的细菌基础 培养基。 其配方如下： 牛肉膏 5g，蛋白胨 10g，NaC1 5g，琼脂 15~20g，水 1000mL，pH7.4~7.6 1、称药品 按实际用量计算后，按配方称取各种药品入瓷杯中。牛肉膏可放在称量 纸上称量，随后放入热水中，牛肉膏溶解后，立即取出纸片。 2、加热溶解 在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并 用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基，则将称好的琼 脂放入已溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最 后补足所失的水分
3、调pH用pH试纸检测培养基的pH，若偏酸，可滴加1mol/LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围。若偏碱，则用1mol/LHC1进行调节。pH的调节通常放在加琼脂之前。4、过滤液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利培养的观察，但是供一般使用的培养基，这步可省略。5、分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。固体培养基约为试管高度的1/5，灭菌后垂直待凝三角瓶装量为容积的一半为宜。6、加棉塞试管口和三角瓶口塞上用普通棉花（非脱脂棉）制作的棉塞。分装过程和装置如图1-1。棉塞的形状、大小和松紧度要合适，四周紧贴管壁，不留缝隙，才能起拔接洋接茶6BA图1-1培养基分装装置A.漏斗分装装置：B.自动分装器1.铁架：2.漏斗：3.乳胶管：4.弹簧夹：5.玻管：6.流速调节：7.装量调节：8.开关到防止杂菌侵入和有利通气的作用。要使棉塞总长约3/5塞入试管口或瓶口内，以防棉塞脱落（图1-2）。有些微生物需要更好的通气，则可用8层纱布制成通气塞。有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞（图1-3）。7、包扎加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸，以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。若培养基分装于试管中，则应以5支或7支在一起，再于棉塞外包一层牛皮5
5 3、调 pH 用 pH 试纸检测培养基的 pH，若偏酸，可滴加 1mol/L NaOH，边加边搅 拌，并随时用 pH 试纸检测，直至达到所需 pH 范围。若偏碱，则用 1mol/L HC1 进行调 节。pH 的调节通常放在加琼脂之前。 4、过滤 液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用 4 层纱布趁热过滤，以利培养 的观察，但是供一般使用的培养基，这步可省略。 5、分装 按实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。分装时可用漏斗 以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。固体培养基约为试管高度的 1/5，灭菌后垂 直待凝;三角瓶装量为容积的一半为宜。 6、加棉塞 试管口和三角瓶口塞上用普通棉花（非脱脂棉）制作的棉塞。分装过程 和装置如图 1-1。棉塞的形状、大小和松紧度要合适，四周紧贴管壁，不留缝隙，才能起 到防止杂菌侵入和有利通气的作用。要使棉塞总长约 3/5 塞入试管口或瓶口内，以防棉塞 脱落（图 1-2）。有些微生物需要更好的通气，则可用 8 层纱布制成通气塞。有时也可用 试管帽或塑料塞代替棉塞（图 1-3）。 7、包扎 加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸，以防灭菌时冷凝水 沾湿棉塞。若培养基分装于试管中，则应以 5 支或 7 支在一起，再于棉塞外包一层牛皮 图 1-1 培养基分装装置 A．漏斗分装装置；B．自动分装器 1．铁架；2．漏斗；3．乳胶管；4．弹簧夹；5．玻管；6．流速调节；7．装量调节；8．开关