(四)溶液中蛋白质浓度的测定 溶液中蛋白质的浓度可根据它们的物理、化学性 质,如折射率、比重、紫外光吸收来测定 化学反应方法,如凯氏定氮、双缩脲反应、福林 酚反应测定;也可用染色法,如氨基黑、考马斯亮 蓝测定; 此外还可用荧光激发、氯胺T、放射性同位素计 数等灵敏度较高的方法。 上述方法,紫外吸收法、双缩脲法、福林一酚试 剂法、考马斯亮蓝染色法最为常用
（四）溶液中蛋白质浓度的测定 溶液中蛋白质的浓度可根据它们的物理、化学性 质，如折射率、比重、紫外光吸收来测定； 化学反应方法，如凯氏定氮、双缩脲反应、福林 -酚反应测定；也可用染色法，如氨基黑、考马斯亮 蓝测定； 此外还可用荧光激发、氯胺T、放射性同位素计 数等灵敏度较高的方法。 上述方法，紫外吸收法、双缩脲法、福林－酚试 剂法、考马斯亮蓝染色法最为常用
(五)纯度检查 测定蛋白质的纯度是化学和物理学的概念,它和蛋 白质所具有的生物活性有着更复杂的关系,蛋白质的 聚合状态、辅基的存在、蛋白质的变性作用等极大 地影响其生物活性,而这些因素的影响有些往往是用 般纯度检查的方法所查不出来的,纯度检查的方法 有 1、HPLC或FPLC 这是蛋白质纯度检查常用的有效方法。美国药典 已规定把HPLC用于胰岛素纯度的检测项目中
（五）纯度检查 测定蛋白质的纯度是化学和物理学的概念，它和蛋 白质所具有的生物活性有着更复杂的关系，蛋白质的 聚合状态、辅基的存在、蛋白质的变性作用等极大 地影响其生物活性，而这些因素的影响有些往往是用 一般纯度检查的方法所查不出来的，纯度检查的方法 有： 1、HPLC或FPLC 这是蛋白质纯度检查常用的有效方法。美国药典 已规定把HPLC用于胰岛素纯度的检测项目中
2、电泳法 3.免疫化学法(适用于产生特异性抗体的蛋白) 4.生物测定法 利用动物体或动物的离体器官、细胞进行生物 效价的测定,这种方法接近动物临床所产生的生物 学效应,因此实际意义也更大 5、分光光度法 (1)紫外分光光度法 (2)红外分光光度法(蛋白分子结构有特别能级, 红外提供分子指纹)
2、电泳法 3．免疫化学法（适用于产生特异性抗体的蛋白） 4．生物测定法 利用动物体或动物的离体器官、细胞进行生物 效价的测定，这种方法接近动物临床所产生的生物 学效应，因此实际意义也更大。 5、分光光度法 （1）紫外分光光度法 （2）红外分光光度法 (蛋白分子结构有特别能级， 红外提供分子指纹)
多肽与蛋白质的化学合成 多肽的合成是50年代开始,在有机溶剂中进行的 均相反应,因此叫作液相合成法,此法在合成分子 量不太大的多肽时是比较成功的,但在合成更大的 蛋白质时,产物还不能表现出全部活力且不能结晶, 1962年建立的固相合成的新方法,对小肽的合 成是很成功的,对大分子的合成,如124肽的核糖核 酸酶,还不能达到天然物质的全部活力 目前试图合成大的蛋白质以及建立快速简便的 成方法是多肽合成化学的特征
二、多肽与蛋白质的化学合成 多肽的合成是50年代开始，在有机溶剂中进行的 均相反应，因此叫作液相合成法，此法在合成分子 量不太大的多肽时是比较成功的，但在合成更大的 蛋白质时，产物还不能表现出全部活力且不能结晶， 1962年建立的固相合成的新方法，对小肽的合 成是很成功的，对大分子的合成，如124肽的核糖核 酸酶，还不能达到天然物质的全部活力。 目前试图合成大的蛋白质以及建立快速简便的合 成方法是多肽合成化学的特征
在多肽合成中,一般需要以下几个主要步骤: ①氨基保护和羧基活化; ②羧基保护和氨基活化; ③接肽和除去保护基团。 (一)基团保护 要实现控制多肽合成,如N末端氨基酸残基的自 由NH2、C末端氨基酸残基的自由COOH以及侧链 上的一些活泼基团,加以封闭或保护。待肽链形成 之后,再将保护基除去。作为保护基,必须既能在 接肽时起到保护作用,在接肽以后,能很容易地除 去,且不致引起肽链的断裂
在多肽合成中，一般需要以下几个主要步骤： ①氨基保护和羧基活化； ②羧基保护和氨基活化； ③接肽和除去保护基团。 （一）基团保护 要实现控制多肽合成，如N-末端氨基酸残基的自 由-NH2、C-末端氨基酸残基的自由-COOH以及侧链 上的一些活泼基团，加以封闭或保护。待肽链形成 之后，再将保护基除去。作为保护基，必须既能在 接肽时起到保护作用，在接肽以后，能很容易地除 去，且不致引起肽链的断裂