两性物质的等电点会因条件不同(如在不同离子 强度的不同缓冲溶液中,或含有一定的有机溶媒的 溶液中)而改变。当盐存在时,蛋白质若结合了较 多的阳离子,则等电点向较高的pH值偏移。反之 蛋白质若结合较多的阴离子,则等电点移向较低的 pH值 用等电点法沉淀蛋白质常需配合盐析操作,而除 去不需要的杂蛋白时,常需配合热变性操作。 等电聚焦电泳除了用于分离蛋白质外,也可用于 测定蛋白质的等电点
两性物质的等电点会因条件不同（如在不同离子 强度的不同缓冲溶液中，或含有一定的有机溶媒的 溶液中）而改变。当盐存在时，蛋白质若结合了较 多的阳离子，则等电点向较高的pH值偏移。反之， 蛋白质若结合较多的阴离子，则等电点移向较低的 pH值。 用等电点法沉淀蛋白质常需配合盐析操作，而除 去不需要的杂蛋白时，常需配合热变性操作。 等电聚焦电泳除了用于分离蛋白质外，也可用于 测定蛋白质的等电点
2、根据蛋白质分子形状和大小的不同来纯化蛋白质 蛋白质的一个主要特点是分子大。由此可以用凝胶 过滤法、超滤法、离心法及透析法等将蛋白质与其 他小分子物质分离,也可将大小不同的蛋白质分离。 I注意]用超滤法时,超滤膜截留分子量常与实际情 况不一致。分子量相近的蛋白质由于在介质中有呈线 形溶质或者是球形溶质的区别,可能出现不同的结 果 葡聚糖凝胶含有少量的酸性基团,故有较弱的离 子交换作用,此外还有吸附作用。在纯化蛋白质时, 可采用低浓度的盐溶液(0.01mol/L),或者用与 待分离蛋白质相同的标准蛋白质预先使凝胶柱平衡 以期不损失所分离的蛋白质
2、根据蛋白质分子形状和大小的不同来纯化蛋白质 蛋白质的一个主要特点是分子大。由此可以用凝胶 过滤法、超滤法、离心法及透析法等将蛋白质与其 他小分子物质分离，也可将大小不同的蛋白质分离。 [注意] 用超滤法时，超滤膜截留分子量常与实际情 况不一致。分子量相近的蛋白质由于在介质中有呈线 形溶质或者是球形溶质的区别，可能出现不同的结 果。 葡聚糖凝胶含有少量的酸性基团，故有较弱的离 子交换作用，此外还有吸附作用。在纯化蛋白质时， 可采用低浓度的盐溶液（0.01mol／L），或者用与 待分离蛋白质相同的标准蛋白质预先使凝胶柱平衡， 以期不损失所分离的蛋白质
3、根据蛋白质溶解度的不同来纯化蛋自质 蛋白质的溶解度受溶液的pH、离子强度、溶剂的 电解质性质及温度等多种因素的影响。在同一特定条 件下,不同蛋白质有不同的溶解度,适当改变外界条 件,可以有选择地控制某一种蛋白质的溶解度,达到 分离的目的。 属于这一类的分离方法有蛋白质的盐溶与盐析法、 结晶法和低温有机溶剂沉淀法 乙醇和丙酮是有机溶剂沉淀法中最常用的有机溶 剂,由于丙酮的介电常数小于乙醇,故丙酮沉淀能力 比乙醇强
3、根据蛋白质溶解度的不同来纯化蛋自质 蛋白质的溶解度受溶液的pH、离子强度、溶剂的 电解质性质及温度等多种因素的影响。在同一特定条 件下，不同蛋白质有不同的溶解度，适当改变外界条 件，可以有选择地控制某一种蛋白质的溶解度，达到 分离的目的。 属于这一类的分离方法有蛋白质的盐溶与盐析法、 结晶法和低温有机溶剂沉淀法。 乙醇和丙酮是有机溶剂沉淀法中最常用的有机溶 剂，由于丙酮的介电常数小于乙醇，故丙酮沉淀能力 比乙醇强
根据蛋白质电离性质的不同来纯化蛋白质 离子交换剂作为一种固定相,本身具有正离子或负 离子基团,它对溶液中不同的带电物质呈现不同的亲 和力,从而使这些物质分离提纯 蛋白质、多肽或氨基酸具有能够离子化的基团。对 蛋白质的离子交换层析,一般多用离子交换纤维和以 葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等为骨架 的离子交换剂。主要是取其有较大的蛋白质吸附容量、 较高的流速和分辨率等优点。 对已知等电点的物质,在pH高于其等电点时,用 阴离子交换剂,在低于其等电点时,用阳离子交换剂
4、根据蛋白质电离性质的不同来纯化蛋白质 离子交换剂作为一种固定相，本身具有正离子或负 离子基团，它对溶液中不同的带电物质呈现不同的亲 和力，从而使这些物质分离提纯。 蛋白质、多肽或氨基酸具有能够离子化的基团。对 蛋白质的离子交换层析，一般多用离子交换纤维和以 葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等为骨架 的离子交换剂。主要是取其有较大的蛋白质吸附容量、 较高的流速和分辨率等优点。 对已知等电点的物质，在pH高于其等电点时，用 阴离子交换剂，在低于其等电点时，用阳离子交换剂
5、根据蛋白质功能专一性的不同来纯化蛋白质 主要的手段是亲和层析法,即利用蛋白质分子能与 其相应的配体进行特异的、非共价键的可逆性结合 而达到纯化的目的 注意]非专一性吸附主要来自吸附剂上的离子基团 和疏水基团。解决这一问题的方法是从制备和选用吸 附剂上着手 固相化金属亲和层析(MAC)是新发展的种亲 和层析技术。蛋白质分子中的咪唑基和巯基可与一些 金属元素(如Cu2+、Zn2+等)形成配位结合,使蛋 白质得到分离纯化
5、根据蛋白质功能专一性的不同来纯化蛋白质 主要的手段是亲和层析法，即利用蛋白质分子能与 其相应的配体进行特异的、非共价键的可逆性结合 而达到纯化的目的。 [注意] 非专一性吸附主要来自吸附剂上的离子基团 和疏水基团。解决这一问题的方法是从制备和选用吸 附剂上着手。 固相化金属亲和层析（IMAC）是新发展的一种亲 和层析技术。蛋白质分子中的咪唑基和巯基可与一些 金属元素（如Cu2＋ 、Zn2+等）形成配位结合，使蛋 白质得到分离纯化