2.实时定量PCR 。 具体实时荧光定量PCR就是通过对PCR扩增反应中每一个 循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定 性的分析。在实时荧光定量PCR反应中，引入了一种荧光 化学物质，随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计， 荧光信号强度也等比例 增加。每经过一个循环，收 0.075 集一个荧光强度信号，这样 0.05 我们就可以通过荧光强度变 化监测产物量的变化，从而 0.025 得到一条荧光扩增曲线图 10 20 30 90 Cycle 11
11 2. 实时定量PCR • 具体实时荧光定量 PCR 就是 通过对 PCR 扩增反应中每一个 循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定 性的分析。在实时荧光定量 PCR 反应中，引入了一种荧光 化学物质，随着PCR 反应的进行， PCR 反应产物不断累计， 荧光信号强度也等比例 增加。每经过一个循环，收 集一个荧光强度信号，这样 我们就可以通过荧光强度变 化监测产物量的变化，从而 得到一条荧光扩增曲线图
Polymer立aicn R=Reporter SG Q=Quenc her Excitai Probe 3 5 on *S6S6 No Emission SG Strand displ(me士 Excitati on Ckavage Emisi 5gTggπ3' 况L on 5 Polymer立ain completed G 3 TagMan荧光探针 SYBR荧光染料 12
12 TaqMan荧光探针 SYBR荧光染料
2.实时定量PCR 。 一般而言，荧光扩增曲线扩增曲线可以分成三个阶段：荧光 背景信号阶段，荧光信号指数扩增阶段和平台期。 ·只有在荧光信号指数扩增阶段，PCR产物量的对数值与起 始模板量之间存在线性关系，可以选择在这个阶段进行定量 分析。 实时荧光定量pcr技术中的一些重要因素： -Ct值。每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经 历的循环数。 -Ct值与起始模板的关系，每个模板的Ct值与该模板的起 始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，C值 越小。可利用来计算出该样品的起始拷贝数。 13
13 2. 实时定量PCR • 一般而言，荧光扩增曲线扩增曲线可以分成三个阶段：荧光 背景信号阶段, 荧光信号指数扩增阶段和平台期。 • 只有在荧光信号指数扩增阶段， PCR 产物量的对数值与起 始模板量之间存在线性关系，可以选择在这个阶段进行定量 分析。 • 实时荧光定量pcr技术中的一些重要因素： – Ct值。每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经 历的循环数。 – Ct值与起始模板的关系，每个模板的Ct值与该模板的起 始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值 越小。可利用来计算出该样品的起始拷贝数