第二章微生物的形态与分类 2,130个衣壳粒中的每一个的分子量为17,300±800Da。 用碱或去垢剂可使烟草花叶病毒粒子降解成蛋白质和核酸两部分。在适宜的温度和离 子强度下,这些因降解而产生的衣壳粒又可自发地重新组装成棒状的衣壳,与完整的病毒 粒子衣壳无法区别,但由于不含核酸,因此无感染能力。如果衣壳粒重新装配时有核酸存 在,则能引起烟草花叶病 病毒RNA 衣壳粒 图2.5.5烟草花叶病毒 (a)病毒粒子电镜图片(X40,000);(b)病毒RNA和衣壳粒排列模式图 头部 衣壳 (头部) 尾鞘 尾鞘 尾丝 基片 基片 尾部 刺突 尾丝 图2.5.6大肠杆菌噬菌体T4(a)电镜图片(X220,000);(b)模式图 (③)有被膜的病毒粒子有的病毒的核衣壳外有一层松散的被膜。被膜主要由蛋白质(常为 糖蛋白)和脂类组成。核衣壳有的是二十面体,有的为螺旋体。如单纯疱疹病毒就是有被 膜的二十面体。粘病毒也有被膜,螺旋状核衣壳盘绕在被膜内。 (4)其它大肠杆菌偶数噬菌体呈蝌蚪状,具有直径40-100nm的二十面体头部,在头部蛋 白质外壳内,一条长约50nm的DNA分子折叠盘绕其中,还有一个长约100m的螺旋对称尾 部。尾部由不同于头部的蛋白质组成,外面包围着可收缩的尾鞘,中间为一空髓,即尾髓。 有的噬菌体的尾部还有颈部、尾丝、基片和刺突,见图2.5.6。T噬菌体的尾部不能收缩, T3噬菌体的尾部较短,噬菌体ΦⅩ174只有头部,没有尾部
第二章 微生物的形态与分类 6/16 2,130 个衣壳粒中的每一个的分子量为 17,300±800 Da。 用碱或去垢剂可使烟草花叶病毒粒子降解成蛋白质和核酸两部分。在适宜的温度和离 子强度下，这些因降解而产生的衣壳粒又可自发地重新组装成棒状的衣壳，与完整的病毒 粒子衣壳无法区别，但由于不含核酸，因此无感染能力。如果衣壳粒重新装配时有核酸存 在，则能引起烟草花叶病。 (a) (b) 图 2.5.5 烟草花叶病毒 (a) 病毒粒子电镜图片（X40,000）；(b)病毒 RNA 和衣壳粒排列模式图 (a) (b) 图 2.5.6 大肠杆菌噬菌体 T4 (a) 电镜图片（X220,000）；(b)模式图 (3) 有被膜的病毒粒子 有的病毒的核衣壳外有一层松散的被膜。被膜主要由蛋白质（常为 糖蛋白）和脂类组成。核衣壳有的是二十面体，有的为螺旋体。如单纯疱疹病毒就是有被 膜的二十面体。粘病毒也有被膜，螺旋状核衣壳盘绕在被膜内。 (4) 其它 大肠杆菌偶数噬菌体呈蝌蚪状，具有直径 40100nm 的二十面体头部，在头部蛋 白质外壳内，一条长约 50nm 的 DNA 分子折叠盘绕其中，还有一个长约 100nm 的螺旋对称尾 部。尾部由不同于头部的蛋白质组成，外面包围着可收缩的尾鞘，中间为一空髓，即尾髓。 有的噬菌体的尾部还有颈部、尾丝、基片和刺突，见图 2.5.6。T1 噬菌体的尾部不能收缩， T3 噬菌体的尾部较短，噬菌体ΦΧ174 只有头部，没有尾部
第二章微生物的形态与分类 痘病毒类是体积最大、结构最复杂的脊柱动物病毒。多数呈砖形,有的卵圆或扁平柱 状。在电子显微镜下,没有明显的衣壳,但在病毒的核髓外有较复杂的脂蛋白外膜包围, 最外层是双层的被膜 弹状病毒( Rhabdovirus)因病毒粒子外形如子弹而得名,其被膜表面呈现横的条纹, 核衣壳为螺旋对称。如狂犬病毒( Rabies virus)的核酸为单链RNA,衣壳粒以螺旋对称排 列围绕着核酸,外包脂蛋白被膜,膜上有血红蛋白凝集性质的刺突 4)包含体( Inclusion Body) 包含体是宿主细胞受病毒感染后形成的一种光学显微镜下可见的小体。其形态呈圆形、 卵圆形或不定形,在细胞内包含体的大小和数量不等。包含体是病毒引起的宿主细胞病变, 大多数是病毒粒子聚集体,少数是病毒蛋白和与病毒感染有关的蛋白质。一般包含体中含 有一个或数个病毒粒子,也有的包含体并不含病毒粒子。包含体在细胞中的位置与病毒的 类型有关,有的在细胞质(如狂犬病毒),有的在核内(如疱疹病毒),有的则在细胞质和 核内都存在(如麻疹病毒)。包含体的大小、形状、组成及在胞内的位置可作为快速鉴定病 毒的依据 1903年, Negri在检查狂犬病病毒( Rabies)感染过的神经细胞时,发现了细胞内的 包含体。现将狂犬病包含体称为内基氏小体( Negri body),是狂犬病的诊断依据。此外, 还有一些特殊名称的包含体,如天花病毒的包含体称为顾氏小体( Guarnieri body),烟草 花叶病毒的包含体称为X小体( X Body)等。 昆虫病毒的包含体常为多角体,离体几年后仍具感染力,可用作为杀虫剂。依形成位 置分核型多角体病毒(NPV),质型多角体病毒(CPV)。除病毒外,衣原体和某些理化因素 也可使细胞形成包含体。 在基因工程中,有些外源基因在宿主菌体内的表达产物也会在细胞内形成一种具膜样 结构的聚集体,也称为包含体。它们是没有活性的蛋白质颗粒,在一级结构上它的氨基酸 顺序是正确的,但其高级结构却是紊乱的。在相差显微镜下,可观察到它们在细胞内是深 色的点,因此又称为光折射体。包含体的直径约0.5~-1微米,较坚硬,不溶于水。包含体 的这一特点可以避免外源基因表达的蛋白质产物被胞内蛋白酶降解并便于提取纯化。通过 变性剂溶解包含体和再复性处理,可以获得有活性的蛋白质产物。 噬菌体稀释液 敏感菌+上层培养基 噬菌班 敏感菌菌苔 培养 下层培养基 双层培养基 图2.5.7利用双层琼脂法形成噬菌斑的过程 5)噬菌斑( Plaque) 噬菌斑是指:在含宿主细菌的固体培养基上,噬菌体使菌体裂解而形成的空斑,见图 2.5.7。噬菌斑的形态多数会形成晕圈,有的是多重同心圆,见图2.5.8。这些特征相对稳 定,可作鉴定噬菌体的依据之 个噬菌斑中可含有约103个噬菌体,因此噬菌斑是噬菌 体的“菌落”。图2.5.9是大肠杆菌噬菌体λ在大肠杆菌菌苔上形成的噬菌斑。 效价(滴度 Title)是微生物或其产物、抗原与抗体等活性髙低的标志。噬菌体效价指 噬菌体的浓度,即每毫升样品含噬菌体的个数。通常是在含敏感菌的平板上形成噬菌斑进 行噬菌体的计数,以每毫升中含有的噬菌斑形成单位( plaque forming unit/m1或pfu/ml) 表示其效价。例如,若每块平皿加lμl稀释10°倍的样品,可形成10个噬菌斑,则噬菌体 效价为10pfu/ml
第二章 微生物的形态与分类 7/16 痘病毒类是体积最大、结构最复杂的脊柱动物病毒。多数呈砖形，有的卵圆或扁平柱 状。在电子显微镜下，没有明显的衣壳，但在病毒的核髓外有较复杂的脂蛋白外膜包围， 最外层是双层的被膜。 弹状病毒（Rhabdovirus）因病毒粒子外形如子弹而得名，其被膜表面呈现横的条纹， 核衣壳为螺旋对称。如狂犬病毒（Rabies virus）的核酸为单链 RNA，衣壳粒以螺旋对称排 列围绕着核酸，外包脂蛋白被膜，膜上有血红蛋白凝集性质的刺突。 4)包含体（Inclusion Body） 包含体是宿主细胞受病毒感染后形成的一种光学显微镜下可见的小体。其形态呈圆形、 卵圆形或不定形，在细胞内包含体的大小和数量不等。包含体是病毒引起的宿主细胞病变， 大多数是病毒粒子聚集体，少数是病毒蛋白和与病毒感染有关的蛋白质。一般包含体中含 有一个或数个病毒粒子，也有的包含体并不含病毒粒子。包含体在细胞中的位置与病毒的 类型有关，有的在细胞质（如狂犬病毒），有的在核内（如疱疹病毒），有的则在细胞质和 核内都存在（如麻疹病毒）。包含体的大小、形状、组成及在胞内的位置可作为快速鉴定病 毒的依据。 1903 年，Negri 在检查狂犬病病毒（Rabies）感染过的神经细胞时，发现了细胞内的 包含体。现将狂犬病包含体称为内基氏小体（ Negri Body），是狂犬病的诊断依据。此外， 还有一些特殊名称的包含体，如天花病毒的包含体称为顾氏小体（Guarnieri Body），烟草 花叶病毒的包含体称为 X 小体（X Body）等。 昆虫病毒的包含体常为多角体，离体几年后仍具感染力，可用作为杀虫剂。依形成位 置分核型多角体病毒（NPV），质型多角体病毒（CPV）。除病毒外，衣原体和某些理化因素 也可使细胞形成包含体。 在基因工程中，有些外源基因在宿主菌体内的表达产物也会在细胞内形成一种具膜样 结构的聚集体，也称为包含体。它们是没有活性的蛋白质颗粒，在一级结构上它的氨基酸 顺序是正确的，但其高级结构却是紊乱的。在相差显微镜下，可观察到它们在细胞内是深 色的点，因此又称为光折射体。包含体的直径约 0.51 微米，较坚硬，不溶于水。包含体 的这一特点可以避免外源基因表达的蛋白质产物被胞内蛋白酶降解并便于提取纯化。通过 变性剂溶解包含体和再复性处理，可以获得有活性的蛋白质产物。 图 2.5.7 利用双层琼脂法形成噬菌斑的过程 5) 噬菌斑（Plaque ） 噬菌斑是指：在含宿主细菌的固体培养基上，噬菌体使菌体裂解而形成的空斑, 见图 2.5.7。噬菌斑的形态多数会形成晕圈，有的是多重同心圆，见图 2.5.8。这些特征相对稳 定，可作鉴定噬菌体的依据之一。一个噬菌斑中可含有约 107 个噬菌体，因此噬菌斑是噬菌 体的“菌落”。图 2.5.9 是大肠杆菌噬菌体λ在大肠杆菌菌苔上形成的噬菌斑。 效价（滴度 Title）是微生物或其产物、抗原与抗体等活性高低的标志。噬菌体效价指 噬菌体的浓度，即每毫升样品含噬菌体的个数。通常是在含敏感菌的平板上形成噬菌斑进 行噬菌体的计数，以每毫升中含有的噬菌斑形成单位 (plaque forming unit/ml 或 pfu/ml) 表示其效价。例如，若每块平皿加 1l 稀释 106 倍的样品，可形成 10 个噬菌斑，则噬菌体 效价为 1010pfu/ml