一、CaC2转化法 1970年M.Mandel和A.Hige发现，大肠杆菌经过氟化钙适 当处理及短暂热休克之后，便能吸收)噬菌体DNA。 1972年美国斯坦福大学S.Cohen报道，经氣化钙处理大肠 杆菌细胞也能摄取质粒DNA
一、CaCl2转化法 1970年M.Mandel和A.Hige发现,大肠杆菌经过氯化钙适 当处理及短暂热休克之后,便能吸收λ噬菌体DNA。 1972年美国斯坦福大学 S.Cohen报道,经氯化钙处理大肠 杆菌细胞也能摄取质粒DNA
1、原理 >细菌处于0℃和低渗氯化钙溶液中，菌细胞壁和膜通透性 增如，菌体膨胀成球形，此时转化混合物中DNA形成抗 DNase羟基-磷酸钙复合物粘附于细胞表面，经短暂热休克 (42℃)后，细胞膜形成许多间隙，DNA进入细胞内。 >在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增 殖，被转化的细菌中，载体中抗生素基因得到表达，在 选择性培养基平板上，可选出所需的转化子。 ●如果感受态细胞做得好，每傲克超螺旋质粒DNA可得 5×107~1×109个转化子
➢ 细菌处于0℃和低渗氯化钙溶液中，菌细胞壁和膜通透性 增加,菌体膨胀成球形，此时转化混合物中DNA形成抗 DNase羟基-磷酸钙复合物粘附于细胞表面,经短暂热休克 (42℃)后，细胞膜形成许多间隙，DNA进入细胞内。 ➢ 在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增 殖，被转化的细菌中，载体中抗生素基因得到表达，在 选择性培养基平板上，可选出所需的转化子。 ● 如果感受态细胞做得好，每微克超螺旋质粒DNA可得 5×107～1×109个转化子。 1、原 理
获得合格的感受态细胞，要注意以下几点： ①用作受体菌的细胞在培养时要掌握好细胞密度，一般在 A600为0.2-0.4左右为好。 ②制备受体细胞的整个过程在0~4℃进行，尽量避免污染。 如果用抗生素筛选转化子，作为对照受体菌应该在此培 养基上不生长。 ③为了提高转化率，可选用复合氟化钙溶液，如FSB溶液
①用作受体菌的细胞在培养时要掌握好细胞密度，一般在 A600为0.2-0.4左右为好。 ②制备受体细胞的整个过程在0～4℃进行,尽量避免污染。 如果用抗生素筛选转化子，作为对照受体菌应该在此培 养基上不生长。 ③为了提高转化率，可选用复合氯化钙溶液，如FSB溶液。 获得合格的感受态细胞，要注意以下几点：