。 实验室常用两种乳糖类似物一异丙基巯基半乳糖苷 (PTG)和巯甲基半乳糖苷（TMG),在酶活性分 析中常用发色底物O-硝基半乳糖苷(ONPG)。因为 它们都不是半乳糖苷酶的底物，所以又称为安慰性诱 导物(gratuitous inducer). HOCH CH, HOCH 0、 HO/ S-C-H HO S-CH2 CHOH H H CH, HO-O、0 OH H OF H H OH NO OH OH H 并丙基巯基半乳糖苷(IPTG) 流甲基半乳糖哲(TMG) O硝基半乳糖苷(ONPG) 图683种乳糖类似物 15
16 • 实验室常用两种乳糖类似物—异丙基巯基半乳糖苷 （IPTG）和巯甲基半乳糖苷（TMG），在酶活性分 析中常用发色底物O-硝基半乳糖苷（ONPG）。因为 它们都不是半乳糖苷酶的底物，所以又称为安慰性诱 导物（gratuitous inducer）
诱导物的作用是诱导新酶的合成，证据： ·用35$标记大肠杆菌细胞（培养基中没有半乳糖）， 将这些带有放射性的细菌转移到不含35$的培养基 中，加入诱导物后B-半乳糖苷酶便开始合成。分 离纯化-半乳糖苷酶，发现这种酶无35标记，说 明这种酶是加入诱导物后新合成的。 17
17 诱导物的作用是诱导新酶的合成，证据： • 用35S标记大肠杆菌细胞（培养基中没有半乳糖）， 将这些带有放射性的细菌转移到不含35S的培养基 中，加入诱导物后β-半乳糖苷酶便开始合成。分 离纯化β-半乳糖苷酶，发现这种酶无35S标记，说 明这种酶是加入诱导物后新合成的
7.2.2操纵子模型及其影响因子 无诱导物，结构基因不表达 aeI基因转派产 生明调物单体，结 阳遇物四聚体 合形成同源因体 Lac操纵子 的调控模式 1ac1同等四体号 O区NA阳结合， 阳渴基因转录 八八八八人 s启动子区/操湖子区 诗导物户动c结构基固特录 麦靴磐股高 合的非活社尼式 无搭性的用透物 000000000000 ，0 Q0000 000000 RNA被转录成 3个蛋白质 P·半乳琳甘南 透过髯：半乳阳背乙酰基转移制 18
18 7. 2. 2 操纵子模型及其影响因子 Lac操纵子 的调控模式
◆①Z,Y,A基因产物由同一条多顺反子mRNA分子 所编码。 ◆②该mRNA分子的启动区(P)位于阻遏基因() 与操纵区(0)之间，不能单独起始半乳糖苷酶和 透过酶基因的高效表达。 ◆③操纵区是DNA上的一小段序列（仅为26bp),是 阻遏物的结合位点。 ◆④当阻遏物与操纵区相结合时，lac mRNA的转录 起始受到抑制。 ◆⑤诱导物通过与阻遏物结合，改变其三维构象，使 之不能与操纵区相结合，诱发lac mRNA的合成。 19
19 ◆ ① Z、Y、A基因产物由同一条多顺反子mRNA分子 所编码。 ◆ ② 该mRNA分子的启动区（P）位于阻遏基因（I） 与操纵区（O）之间，不能单独起始半乳糖苷酶和 透过酶基因的高效表达。 ◆ ③ 操纵区是DNA上的一小段序列（仅为26bp），是 阻遏物的结合位点。 ◆ ④ 当阻遏物与操纵区相结合时，lac mRNA的转录 起始受到抑制。 ◆ ⑤ 诱导物通过与阻遏物结合，改变其三维构象，使 之不能与操纵区相结合，诱发lac mRNA的合成
加诱导物 去掉诱导物 1 ac nRNA水平 诱导物的加入和去除对/ac mRNA的影响 诱导后的水啊 (培养基中有无诱导物对Lc mRNA及B-半乳糖苷酶活性的 本底水啊 本底水平 影响) 10 12 分钟 B.半乳糖苷悔活性 带后今 诱导后的水平 本底水平 20
20 (培养基中有无诱导物对Lac mRNA及β-半乳糖苷酶活性的 影响) 诱导物的加入和去除对lac mRNA的影响