速率区带离心(rate-zonal centrifugation) 不能精确测定分子量，因为蛋 白质的形状差异也影响沉降率； Organelle fraction 一次分离多种不同类型聚合物 1.09 Lysosomes 或颗粒的最有效方法 E 1.11 (1.12g/cm31 115 Mitochondria (1.18g/cm31 平衡密度梯度离心(equilibrium 1.19 density-gradient entrifugation): 1.22 Peroxisomes 1.25 用于分离DNA和细胞器 (1.23gcm31 Before After centrifugation centrifugation
á不能精确测定分子量，因为蛋 白质的形状差异也影响沉降率； á一次分离多种不同类型聚合物 或颗粒的最有效方法 平衡密度梯度离心（equilibrium density-gradient entrifugation）： 用于分离 DNA 和细胞器 速率区带离心（rate-zonal centrifugation）
电泳(electrophoresis） 带电颗粒在电场中的移动的速度，由电荷-质量 比决定。 Sample UUUU儿UUU儿U Direction of migration
② 电泳（electrophoresis） 带电颗粒在电场中的移动的速度，由电荷– 质量 比决定
电泳（(electrophoresis）. I.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE) Ⅱ.等电聚焦(isoelectric focusing,IEF) Ⅲ.双向电泳(two-dimensional gel electrophoresis) V.脉冲电泳(pulsed-field gel electrophoresis)
电泳（electrophoresis） Ⅰ. SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE） Ⅱ. 等电聚焦（isoelectric focusing ，IEF ） Ⅲ. 双向电泳（two-dimensional gel electrophoresis） Ⅳ. 脉冲电泳（pulsed-field gel electrophoresis）
I.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE) 凝胶 8丙烯酰胺(acrylamide),甲叉双丙烯酰 胺(methylenebisacrylamide)聚合而成； 8凝胶孔径：选择丙烯酰胺浓度，甲叉双丙 烯酰胺胶联剂的浓度； B凝胶有分子筛效应
Ⅰ. SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSpolyacrylamide gel electrophoresis，PAGE） 凝胶 ±丙烯酰胺（acrylamide），甲叉双丙烯酰 胺（methylenebisacrylamide）聚合而成； ±凝胶孔径：选择丙烯酰胺浓度，甲叉双丙 烯酰胺胶联剂的浓度； ±凝胶有分子筛效应
SDS -PAGE 0 Na*O-S-O-(CH2)CHg SDS (sodium dodecyl sulfate) 0 Sodium dodecyl sulfate 阴离子洗涤剂，几乎能破坏 (SDS) 天然蛋白质中所有的非共价键，从而使多亚基蛋白 质解聚，并使多肽链呈伸展状态，消除了蛋白质形 状对迁移率(migration rate)的影响； BSDS以1：2的比例与肽链中的氨基酸残基结合，使 变性蛋白质带上大量的净负电荷，而且电荷量与蛋 白质分子量（即肽链长度）成正比。所以分子量成 为决定蛋白质迁移率的唯一因素
SDS -PAGE SDS（sodium dodecyl sulfate） ±阴离子洗涤剂，几乎能破坏 天然蛋白质中所有的非共价键，从而使多亚基蛋白 质解聚，并使多肽链呈伸展状态，消除了蛋白质形 状对迁移率（migration rate）的影响； ± SDS 以 1:2 的比例与肽链中的氨基酸残基结合，使 变性蛋白质带上大量的净负电荷，而且电荷量与蛋 白质分子量（即肽链长度）成正比。所以分子量成 为决定蛋白质迁移率的唯一因素