离心(centrifugation) 回沉降系数(sedimentation constant):每单位离 心场的速度(S)。与蛋白质的密度和形状有关, 也与介质的密度和粘度有关。 回离心可用于两个方面: ◆作为分离技术:从混合物中分离一种成分; ◆作为分析技术:测定物质的物理性质,如分子 量,密度,形状及平衡结合常数(equilibrium binding constants)
离心(centrifugation) 沉降系数(sedimentation constant):每单位离 心场的速度(S)。与蛋白质的密度和形状有关, 也与介质的密度和粘度有关。 离心可用于两个方面: (作为分离技术:从混合物中分离一种成分; (作为分析技术:测定物质的物理性质,如分子 量,密度,形状及平衡结合常数(equilibrium binding constants)
离心(centrifugation) I.差速离心(differential centrifugation) IⅡ.速率区带离心(rate-zonal centrifugation)
离心(centrifugation) Ⅰ. 差速离心(differential centrifugation) Ⅱ. 速率区带离心(rate-zonal centrifugation)
I,差速离心(differential centrifugation) Dlfforontlal contrifugation mpla 回从组织匀浆中把可溶性 More dense particle 的蛋白质与细胞的不溶 性成分分开。 Centrifugal force 回离心后,蛋白质留在上清 液(supernatant)中, 其他成分形成沉淀 (pellet)
Ⅰ. 差速离心(differential centrifugation) 从组织匀浆中把可溶性 的 蛋白质与细胞的不溶 性成分分开。 离心后,蛋白质留在上清 液(supernatant)中, 其他成分形成沉淀 (pellet)
差速离心(differential centrifugation) Filter homogenate to remove clumps of 采用不同的 unbroken cells, connective 速度和时间 tissue,etc. Centrifuge 可以分离不 同的细胞结 构 600g× Flltered -Mltochondria, Plasma -Ribosomal Soluble nomogenate chloroplasts, membrane, subunits, portlon lysosomes, microsoma small of and fraction polyrlba- cytoplasm peroxlsomes (fragments of somes (cytosol) endoplasmic retlculum) and large polyrlbosames 速度个时间
差速离心(differential centrifugation) 速度 时间 采用不同的 速度和时间 可以分离不 同的细胞结 构
Ⅱ.速率区带离心(rate-zonal Rate-zonal centrifugatlon centrifugation Larger particle Smaller particle- ©用蔗糖、甘油或氯化铯形成密度 度; Contrifuge g高速离心机(~40,000r/min); Centrifugal force Partices suttle according to ©离心后,被分离的物质分布在相 的密度区带内; 旷注意:控制时间。太短,达不到 Collect Hole nd d 充分分离;太长,分离物沉淀到 心管底部
Ⅱ. 速率区带离心(rate-zonal centrifugation) )用蔗糖、甘油或氯化铯形成密度 度; )高速离心机(~ 40,000 r/min); )离心后,被分离的物质分布在相 的密度区带内; )注意:控制时间。 太短,达不到 充分分离;太长,分离物沉淀到 心管底部