Ti质粒的T-DNA的同源性鐘鱼碱型T-DNAOCSNOS胭脂碱型T-DNA
5 7 iaaH iaaM ipt 6a 6b OCS NOS acs 鱼碱型T-DNA 胭脂碱型T-DNA Ti质粒的T-DNA的同源性
2.Ti质粒载体1)Ti质粒作为载体的问题i)太大，无适合克隆位点ii)T-DNA的存在不能使转化细胞再生为完整植株2)载体类型i）中间载体（intermediatevector）由以下几部分组成：适合于E.coli和A.tumefaciens自主复制和选择用标记基因适合于植物细胞选择用标记基因一段来自天然Ti质粒的部分T-DNA序列（提供同源重组）1-2个来自T-DNA的25bp重复序列用于表达外源基因的DNA序列（如启动子、终止子序列）
2. Ti质粒载体 1) Ti质粒作为载体的问题 i) 太大，无适合克隆位点 ii)T-DNA的存在不能使转化细胞再生为完整植株 2) 载体类型 i)中间载体(intermediate vector) 由以下几部分组成： 适合于E.coli和A.tumefaciens自主复制和选择用标记 基因 适合于植物细胞选择用标记基因 一段来自天然Ti质粒的部分T-DNA序列（提供同源重组） 1-2个来自T-DNA的25bp重复序列 用于表达外源基因的DNA序列（如启动子、终止子序列）
重组DNA的转移过程：转化接合中间载体或重组子E.coli(中宿主)A.tumefaciens一在根癌农杆菌中与天然Ti质粒或非致瘤质粒发生共整合作用→感染植物受伤组织或与植物细胞共培养转移T-DNA进入植物细胞并整合到染色体DNA中一外源基因表达
重组DNA的转移过程： 中间载体或重组子 E.coli(中宿主) A.tumefaciens 在根癌农杆菌中与天然Ti质粒或非致瘤质粒发生共 整合作用 感染植物受伤组织或与植物细胞共培养 T-DNA进入植物细胞并整合到染色体DNA中 外 源基因表达 转化 接合 转移
根癌农杆菌中Ti质粒的转移A.tGTi细菌间DNA的转移A.tA.tTiT-DNA细菌-植物间DNA的转移
Ti A.t G - A.t A.t G - 细菌间DNA的转移 Ti A.t A.t A.t 细菌-植物间DNA的转移 根癌农杆菌中Ti质粒的转移
T载体的共整合作用Ti质粒tms-LIHOCStmrpMON载体Spe/StrNOSKan共整合作用tmsLKanHSpe/StrHNOs自OCStmr共培养tmsLISpe/StrNOSOCSKantmr植物细胞内+LIHSpe/StrNOSKan
LIH Kanr Spe/Strr LIH tms OCS tmr 共整合作用 共培养 Ti 质粒 pMON载体 植物细胞内 LIH LIH Ti载体的共整合作用