2004年第2期 江西饲料 水产养殖 鱼类免疫增强剂的研究进展 舟山市粮食局孙德文浙江大学动物科学学院张艳秋黄磊 摘要:免疫增强剂在鱼类疾病防治中发挥巨 关键词:免疫增强剂;鱼类:非特异性免疫因 大的作用,通过作用于非特异性免疫因子来提高子。 鱼类的抗病能力并减少抗生素等化学药物带来 随着集约化养殖技术的应用,养殖规模突飞 的负面影响。本文主要介绍了左旋咪唑、葡聚糖、猛进。然而制约养殖生产的问题也日益突出。水 乳铁蛋白、几丁质、维生素C、E等几种免疫增强环境污染、高密度养殖等不可避免地影响养殖对 剂在鱼类养殖业中的作用。 象的健康,使其感染疾病的机率大大提高,导致 食后子子,制每类胡在中 合饲料中添加2%~5%,可使蛋黄颜色加深,还定比例时,可起到增加畜禽产品色泽的作用。 能提高蛋重。 20胡萝卜 14大麦叶和黑麦叶 胡萝卜每kg含类胡萝卜素522mg,胡萝卜叶 大麦叶青割每kg干草含胡萝卜素391.43mg每kg含类胡萝卜素171.5mg在蛋鸡日粮中胡萝 黑麦草青割每kg干草含胡萝卜素200~342.2mg、卜占20%~30%比例时,即可有效地提高蛋黄色 在蛋鸡日粮中添加这些青饲料,能够有效地提高泽。 蛋黄色泽。 21红辣椒粉 15白菜和甘蓝 将食用红辣椒烘干,绞碎或粉碎制粉,每kg 每kg白菜干物质含胡萝卜素491.66mg,每含类胡萝卜素275~1650mg在鸡日粮中添加 kg硬花甘蓝叶粉含叶黄素670mg,在蛋鸡日粮中0.3%~0.6%红辣椒粉,可增进食欲,帮助消化, 添加一定比例的白菜成甘蓝叶,对增加蛋黄颜色促进生长,还能提高产蛋率,显著增加禽产品色 有较好的效果。 泽。 16大豆和黄麻叶 22黄玉米 每kg大豆茎叶青割干草含胡萝卜素 黄玉米每kg含类胡萝卜素8~50mg,玉米面 289.86mg,每kg黄麻叶粉含叶黄素800mg,在蛋筋粉每kg含叶黄素125~330mg。用60%的黄玉 鸡日粮中使用较多大豆青割叶粉,或添加适量的米配合日粮饲养10d,蛋黄颜色即可从1级提高 青割黄麻叶粉,均能有效地提高蛋黄色泽。 到8级,并可使肉鸡的皮肤变为理想的杏黄色。 17苋菜 23玉米花粉和玉米茎叶 在蛋鸡日粮中,精料与苋菜的比例达1: 玉米花粉掺入饲料中喂蛋鸡,不但可提高产 .8~1:1.2,可使鸡蛋颜色呈杏黄色和桔黄色,蛋率11%,而且可使蛋黄增大,颜色特别鲜艳,青 不喂苋菜的鸡蛋蛋黄为淡黄色,且可提高产蛋总割玉米茎叶每kg含类胡萝卜63.4mg,如磨碎喂 重量6.6%~15.3% 蛋鸡、对蛋黄增色也有一定效果。 18苜蓿粉 24牛粪粉 紫花苜蓿在开花前期每kg干草含类胡萝卜 将鲜牛粪经灭菌处理,烘干制粉,在饲料中 素330mg,黄花苜蓿开花盛期每kg含类胡萝卜素添加1%~2%,可显著增加蛋黄颜色,而且能使 500mg,脱水苜蓿叶粉含叶黄素1800mg/kg用鸡皮肤变成黄色。 5%的首蓿粉配合蛋鸡日粮连喂15d,即可使蛋25腐叶土 黄色泽从1级提高到4级。 在笼养鸡饲料中添加5%~10%菜园或果园 19南瓜和西胡芦 表层的腐叶土,并加10%~20%的牧草粉,可使 南瓜含有较多的类胡萝卜素和叶黄素,西胡蛋黄色泽鲜艳,鸡肉鲜美可口 1994-2007 China Academic Journal Electronic publishing house. all rights reserved. http: //www.cnki.net
—!"— #$$% 年第 # 期 江西饲料 ((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((( 将食用后桔子皮和叶子收集，晾干制粉，配 合饲料中添加 #& ’ (& ，可使蛋黄颜色加深，还 能提高蛋重。 !% 大麦叶和黑麦叶 大麦叶青割每 )* 干草含胡萝卜素+"!, %+-*， 黑麦草青割每 )* 干草含胡萝卜素 #$$ ’ +%#, .#-*、 在蛋鸡日粮中添加这些青饲料，能够有效地提高 蛋黄色泽。 !( 白菜和甘蓝 每 )* 白菜干物质含胡萝卜素 %"!, //-*，每 )* 硬花甘蓝叶粉含叶黄素 /.$-*，在蛋鸡日粮中 添加一定比例的白菜成甘蓝叶，对增加蛋黄颜色 有较好的效果。 !/ 大豆和黄麻叶 每 )* 大 豆 茎 叶 青 割 干 草 含 胡 萝 卜 素 #0", 0/-*，每 )* 黄麻叶粉含叶黄素 0$$-*，在蛋 鸡日粮中使用较多大豆青割叶粉，或添加适量的 青割黄麻叶粉，均能有效地提高蛋黄色泽。 !. 苋菜 在蛋鸡日粮中，精料与苋菜的比例达 !1 $, 0 ’ !1 !, #，可使鸡蛋颜色呈杏黄色和桔黄色， 不喂苋菜的鸡蛋蛋黄为淡黄色，且可提高产蛋总 重量 /, /& ’ !(, +& 。 !0 苜蓿粉 紫花苜蓿在开花前期每 )* 干草含类胡萝卜 素 ++$-*，黄花苜蓿开花盛期每 )* 含类胡萝卜素 ($$-*，脱水苜蓿叶粉含叶黄素 !0$$-* 2 )*。用 (& 的苜蓿粉配合蛋鸡日粮连喂 !( 3，即可使蛋 黄色泽从 ! 级提高到 % 级。 !" 南瓜和西胡芦 南瓜含有较多的类胡萝卜素和叶黄素，西胡 芦每 )* 含类胡萝卜素 /$-*，在畜禽日粮中占一 定比例时，可起到增加畜禽产品色泽的作用。 #$ 胡萝卜 胡萝卜每 )* 含类胡萝卜素 (##-*，胡萝卜叶 每 )* 含类胡萝卜素 !.!, (-*。在蛋鸡日粮中胡萝 卜占 #$& ’ +$& 比例时，即可有效地提高蛋黄色 泽。 #! 红辣椒粉 将食用红辣椒烘干，绞碎或粉碎制粉，每 )* 含类胡萝卜素 #.( ’ !/($-*。在鸡日粮中添加 $, +& ’ $, /& 红辣椒粉，可增进食欲，帮助消化， 促进生长，还能提高产蛋率，显著增加禽产品色 泽。 ## 黄玉米 黄玉米每 )* 含类胡萝卜素 0 ’ ($-*，玉米面 筋粉每 )* 含叶黄素 !#( ’ ++$-*。用 /$& 的黄玉 米配合日粮饲养 !$3，蛋黄颜色即可从 ! 级提高 到 0 级，并可使肉鸡的皮肤变为理想的杏黄色。 #+ 玉米花粉和玉米茎叶 玉米花粉掺入饲料中喂蛋鸡，不但可提高产 蛋率 !!& ，而且可使蛋黄增大，颜色特别鲜艳，青 割玉米茎叶每 )* 含类胡萝卜 /+, %-*，如磨碎喂 蛋鸡、对蛋黄增色也有一定效果。 #% 牛粪粉 将鲜牛粪经灭菌处理，烘干制粉，在饲料中 添加 !& ’ #& ，可显著增加蛋黄颜色，而且能使 鸡皮肤变成黄色。 #( 腐叶土 在笼养鸡饲料中添加 (& ’ !$& 菜园或果园 表层的腐叶土，并加 !$& ’ #$& 的牧草粉，可使 蛋黄色泽鲜艳，鸡肉鲜美可口。 摘要：免疫增强剂在鱼类疾病防治中发挥巨 大的作用，通过作用于非特异性免疫因子来提高 鱼类的抗病能力并减少抗生素等化学药物带来 的负面影响。本文主要介绍了左旋咪唑、葡聚糖、 乳铁蛋白、几丁质、维生素 4、5 等几种免疫增强 剂在鱼类养殖业中的作用。 关键词：免疫增强剂；鱼类；非特异性免疫因 子。 随着集约化养殖技术的应用，养殖规模突飞 猛进。然而制约养殖生产的问题也日益突出。水 环境污染、高密度养殖等不可避免地影响养殖对 象的健康，使其感染疾病的机率大大提高，导致 鱼 类 免 疫 增 强 剂 的 研 究 进 展 舟山市粮食局 孙德文 浙江大学动物科学学院 张艳秋 黄 磊 水 产 养 殖
2004年第2期 江西饲料 养殖病害频繁发生,造成水产动物的大量死亡。巨噬细胞的同一受体位点上,通过酪氨酸或蛋 目前,通过提高水产动物免疫力来抵抗疾病的发激酶C途径触发并激活单核细胞的吞噬、合成和 生已成为研究的热点。免疫增强剂是指单独或同分泌功能。巨噬细胞正是通过内吞和分泌一系列 时与抗原使用均能增强机体免疫应答的物质,按效应分子而发挥作用。MDP能显著促进大鼠腹腔 其功能可以分为两大类:一类是增强水产动物的巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子,而这种物质是巨噬 非特异性免疫功能;另一类是增强由疫苗诱导的细胞发挥毒作用最主要的效应分子。给虹鳟在腹 特异性免疫机能(又称佐剂作用)。免疫增强剂能腔内注射MDP可以增强巨噬细胞活性及肾白血 够促进鱼的机体免疫应答反应,增强鱼类抗病能球的呼吸爆发和转移活性,同时也增强了虹鳟对 力。鱼的防御机制与哺乳动物基本相似,它包括杀鲑气单胞菌( Aeromonas salmonicida)的抵抗 非特异性和特异性免疫两种,但是免疫增强剂主力 要是增强鱼的非特异性免疫机制,它主要通过活2.2葡聚糖( Glucan) 化鱼自身的免疫机能从而达到防御效果。免疫增 葡聚糖的免疫增强效果已得广泛研究,现应 强剂可以激活鱼的嗜中性粒细胞及吞噬细胞的用于水产动物中的有酵母葡聚糖,β-1,3葡聚糖 吞噬作用,杀伤作用,趋化作用激活淋巴细胞并使(ⅴST),肽聚糖几种类型。β-1,3葡聚糖(ST)增 其分泌淋巴因子以协调体液免疫和细胞免疫,并强大西洋鲑、虹鳟等的溶菌酶和补体的活性,吞 刺激抗体产生和激活补体。目前用于鱼的免疫增噬细胞的呼吸爆炸作用及其过氧化物的产量 强剂主要有以下几类:(1)左旋咪唑( Levamisole,( santan,1997, Castro,1999)。此外,葡聚糖还能 IMsS);(2)来源于细菌细胞的免疫增强剂;(3)多增强虹鳟抵抗IHN病毒的能力( Lapatra,1998)← 糖;(4)维生素;(5)乳铁蛋白。 Yano给鲤鱼注射β-1,3葡聚糖后增强了肾细胞 1左旋咪唑( Levamisole,LMS) 吞噬能力,E. tarda攻毒试验表明增强了抗菌性。 左旋咪唑能够使受抑制的巨噬细胞T细胞对大西洋鲑投饲含β-1,3葡聚糖lg/kg饲料,增 功能恢复正常,这可能与激活环核磷酸二酯酶从强了抗鳗弧菌及杀鲑细菌的能力。 Paulsen将大西 而降低淋巴细胞和吞噬细胞内环腺苷酸含量有洋鲑巨噬细胞与β-1,3葡聚糖共同培养,溶菌 关。左旋咪唑可以增强嗜中性白细胞的变形能力酶活性比对照组提高了5倍。酵母葡聚糖能提高 和吞噬活性及提高血清中吞噬细胞和白血球、溶鱼类的溶菌酶产量和巨噬细胞的杀菌活性 菌酶的含量. Anderson等人把经沙门氏菌的菌体( orgense,rtad,19)虹江鳟在注射酵母葡聚 抗原浸浴的虹鳟放在左旋咪唑(浓度为5ug/ml)糖后,其溶菌酶的活性、补体、吞噬细胞的杀菌作 中浸浴30m,可增加虹鳟体液中的抗体浓度和用都明显增强,同时葡聚糖还可促进吞噬细胞产 吞噬细胞活性。但给虹鳟注射高剂量的左旋咪唑 生大量超氧化物及促进血液中白血球数量增 (5kg/mg),鱼肾脏中的白血球并没有显示出较高 的活性。 Mulero(1998)等报道日粮中添加左旋咪 加。注射酵母葡聚糖的大西洋鲑鱼体液中的补体 和溶菌酶的含量增加。肽聚糖同样可以激活免疫 唑后,鱼类白细胞的吞噬活性和呼吸爆炸作用增 强,巨噬细胞活化因子(MAF)的产量增加。左旋 系统的吞噬细胞,使其分泌多种具有重要免疫调 咪唑不仅有免疫增强效果且能口服,在水产动物节功能的因子及重要介质,给黄尾鱼口服肽聚糖 中使用能提高抗病力,降低死亡率。不过,如给予和给鲤鱼腹腔注射肽聚糖都能提高吞噬细胞的 量不适当,会出现免疫抑制。因此,在使用中应充 吞噬作用。肽聚糖作为增强剂给虹鳟注射,可以 分注意这点。 帮助虹鳟减少弧菌病的发生。 2来源于细菌细胞的免疫增强剂 2.3脂多糖(LPS) 2.1胞壁酰二肽(MDP) 脂多糖(LPS)存在于所有革兰氏阴性菌外膜 胞壁酰二肽是从结核菌中提取出来的低分中,是调节哺乳动物免疫功能的最为有效的一种 子肽,这种二肽作为免疫增强剂可以激活巨噬细多糖,主要作用于嗜中性白细胞和巨噬细胞,还 胞和B淋巴细胞及补体,它与5-羟色胺结合于能促进lgM的生成(马永红等,1998)。不同种类 o1994-2007ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreservedhttp://www.cnki.net
!""# 年第 ! 期 江西饲料 —!"— 养殖病害频繁发生，造成水产动物的大量死亡。 目前，通过提高水产动物免疫力来抵抗疾病的发 生已成为研究的热点。免疫增强剂是指单独或同 时与抗原使用均能增强机体免疫应答的物质，按 其功能可以分为两大类：一类是增强水产动物的 非特异性免疫功能；另一类是增强由疫苗诱导的 特异性免疫机能$又称佐剂作用%。免疫增强剂能 够促进鱼的机体免疫应答反应，增强鱼类抗病能 力。鱼的防御机制与哺乳动物基本相似，它包括 非特异性和特异性免疫两种，但是免疫增强剂主 要是增强鱼的非特异性免疫机制，它主要通过活 化鱼自身的免疫机能从而达到防御效果。免疫增 强剂可以激活鱼的嗜中性粒细胞及吞噬细胞的 吞噬作用，杀伤作用，趋化作用激活淋巴细胞并使 其分泌淋巴因子以协调体液免疫和细胞免疫，并 刺激抗体产生和激活补体。目前用于鱼的免疫增 强剂主要有以下几类：$& % 左旋咪唑 $’()*+,-./(0 ’12%；$!% 来源于细菌细胞的免疫增强剂；$3 % 多 糖；$#%维生素；$4%乳铁蛋白。 & 左旋咪唑$’()*+,-./(0 ’12% 左旋咪唑能够使受抑制的巨噬细胞 5 细胞 功能恢复正常，这可能与激活环核磷酸二酯酶从 而降低淋巴细胞和吞噬细胞内环腺苷酸含量有 关。左旋咪唑可以增强嗜中性白细胞的变形能力 和吞噬活性及提高血清中吞噬细胞和白血球、溶 菌酶的含量。678(9-.7 等人把经沙门氏菌的菌体 抗原浸浴的虹鳟放在左旋咪唑 $浓度为 4:; < +/% 中浸浴 3"+,7，可增加虹鳟体液中的抗体浓度和 吞噬细胞活性。但给虹鳟注射高剂量的左旋咪唑 $4=; < +; %，鱼肾脏中的白血球并没有显示出较高 的活性。1:/(9. $&>>?% 等报道日粮中添加左旋咪 唑后，鱼类白细胞的吞噬活性和呼吸爆炸作用增 强，巨噬细胞活化因子 $16@% 的产量增加。左旋 咪唑不仅有免疫增强效果且能口服，在水产动物 中使用能提高抗病力，降低死亡率。不过，如给予 量不适当，会出现免疫抑制。因此，在使用中应充 分注意这点。 ! 来源于细菌细胞的免疫增强剂 !A & 胞壁酰二肽$1BC% 胞壁酰二肽是从结核菌中提取出来的低分 子肽，这种二肽作为免疫增强剂可以激活巨噬细 胞和 D 淋巴细胞及补体，它与 4 E 羟色胺结合于 巨噬细胞的同一受体位点上，通过酪氨酸或蛋白 激酶 F 途径触发并激活单核细胞的吞噬、合成和 分泌功能。巨噬细胞正是通过内吞和分泌一系列 效应分子而发挥作用。1BC 能显著促进大鼠腹腔 巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子，而这种物质是巨噬 细胞发挥毒作用最主要的效应分子。给虹鳟在腹 腔内注射 1BC 可以增强巨噬细胞活性及肾白血 球的呼吸爆发和转移活性，同时也增强了虹鳟对 杀鲑气单胞菌 $6(9.+.7*- -*/+.7,G,8* % 的抵抗 力。 !A ! 葡聚糖$H/:G*7% 葡聚糖的免疫增强效果已得广泛研究，现应 用于水产动物中的有酵母葡聚糖，! E &0 3 葡聚糖 $I25%，肽聚糖几种类型。! E &0 3 葡聚糖$I25%增 强大西洋鲑、虹鳟等的溶菌酶和补体的活性，吞 噬细胞的呼吸爆炸作用及其过氧化物的产量 $-*7J*9+0 &>>K0 F*-J9.0 &>>>%。此外，葡聚糖还能 增强虹鳟抵抗 LMN 病毒的能力 $’*O*J9*0 &>>? %。 P*7. 给鲤鱼注射 ! E &0 3 葡聚糖后增强了肾细胞 吞噬能力，QA J*98* 攻毒试验表明增强了抗菌性。 对大西洋鲑投饲含 ! E &0 3 葡聚糖 /; < =; 饲料，增 强了抗鳗弧菌及杀鲑细菌的能力。C*:/-(7 将大西 洋鲑巨噬细胞与 ! E &0 3 葡聚糖共同培养，溶菌 酶活性比对照组提高了 4 倍。酵母葡聚糖能提高 鱼 类 的 溶 菌 酶 产 量 和 巨 噬 细 胞 的 杀 菌 活 性 $R.9;(7-(70 S.9-J*80 &>>3 %。虹鳟在注射酵母葡聚 糖后，其溶菌酶的活性、补体、吞噬细胞的杀菌作 用都明显增强，同时葡聚糖还可促进吞噬细胞产 生大量超氧化物及促进血液中白血球数量增 加。注射酵母葡聚糖的大西洋鲑鱼体液中的补体 和溶菌酶的含量增加。肽聚糖同样可以激活免疫 系统的吞噬细胞，使其分泌多种具有重要免疫调 节功能的因子及重要介质，给黄尾鱼口服肽聚糖 和给鲤鱼腹腔注射肽聚糖都能提高吞噬细胞的 吞噬作用。肽聚糖作为增强剂给虹鳟注射，可以 帮助虹鳟减少弧菌病的发生。 !A 3 脂多糖$’C2% 脂多糖 $’C2% 存在于所有革兰氏阴性菌外膜 中，是调节哺乳动物免疫功能的最为有效的一种 多糖，主要作用于嗜中性白细胞和巨噬细胞，还 能促进 /;1 的生成 $马永红等，&>>? %。不同种类 水 产 养 殖
2004年第2期 江西饲料 水产养殖 多糖的结构不同,LPS由3个重要的亚单位,包括合,而阻止病原菌在胃肠道的粘接和定植,使其 ◎一特异性侧链、核内区域以及最内部的类脂A最终随粪便排出体外。第三,它能够刺激免疫反 组成。○一特异性侧链负责生物体的◎一抗原特应。免疫刺激包括佐剂和免疫调节效应两个方 异性,核内区域以及最内部的类脂化合物A分别面。酵母细胞壁具有很强的抗原激活特性,所以 和原生质膜及细胞壁上的糖肽部分相连接。类脂甘露寡聚糖在刺激机体免疫应答上起到一定的 A是葡萄糖苷一氨基葡萄糖复合物,是LPS的内作用,而且它能与一定毒素、病毒和真核细胞的表 毒素,在增强动物免疫机制中发挥重要作用。LPS面结合而作为这些外源抗原的佐剂( Adjuvants), 能刺激B细胞的分化,并能增强鱼类巨噬细胞的能减缓抗原的吸收,增加抗原的效价,从而加强 活性( Salati等,1987)。体外试验中发现,LPS能提细胞和体液的免疫性。此外,它也可通过刺激肝 高大西洋鮭巨噬细胞过氧化物阴离子的产量,并脏分泌甘露糖结合蛋白而影响免疫系统,这种蛋 增强其噬菌作用( Neuman等,1995)。同样,LPS白质能与细菌夹膜相粘接并触发一连串的补体, 能刺激淋巴细胞中巨噬细胞活化因子(MAF)的从而启动免疫系统产生应答反应 产生( Neumann等,1995)以及鲍鱼单核细胞中细4维生素 胞介素一1类分子的产生,而给鲽鱼的腹膜注射4.1维生素C LPS后鲽鱼的巨噬细胞的移动性提高( Sakai99) 维生素C是动物生长和维持正常生理机能 3多糖 所必须的营养物质,大多数鸟类和哺乳动物能利 3.1几丁质( Chitin) 用葡萄糖醛酸合成维生素C,但许多水产动物则 几丁质是来源于甲壳类和昆虫外骨骼或某不能合成,必须从食物中获得。维生素C对鱼类 些真菌类的细胞壁的一种多糖,给虹鳟注射几丁的体液免疫和非特异性细胞免疫均具有一定的 质后激活巨噬细胞活性,增强其抗 Vibrio anguil-影响,因而在鱼饲料中添加维生素C能够增强其 larum的感染力。给黄尾鱼注射几丁质可增强其免疫功能,提高抗病能力和存活率。 Schmidt 抗巴斯德菌( Palsteurella piscicida)的感染能力,(1997)报道,维生素C是动物正常免疫机能所必 但给鼠或猪注射几丁质却没有增加非特异免疫需的,但它并不是直接起作用,而是与一些抗氧 机制活性。脱乙胺几丁质( Chitosan)也具有免疫化物质如维生素E和对机体有防御机能的金属 刺激物的作用,给虹鳟注射或浸浴脱乙胺几丁质元素铁、铜等的运输有协同作用。 Verlhac(1998) 可增强虹鳟对A. salmonicida感染的抵抗力。An-等发现高维生素C(3000mgkg)含量的饲料能显 person(1995)报道,注射了脱乙胺几丁质的虹鳟著提高虹鳟的溶菌酶活性。国外有关维生素C与 因体液中抗体浓度提高及吞噬细胞杀菌能力增鱼类免疫机制间关系的硏究表明,在饲料中添加 强而增加了抗线虫的感染能力。 维生素C能够明显影响鱼类补体的抗体依赖性 3.2甘露寡聚糖 溶血活动。 Hardie等(1991)对大西洋鲑 Salmo 寡聚糖也可以增加鱼的免疫细胞释放细胞 salar的研究也有类似的结果,大西洋鲑血清补体 因子,使T细胞增殖分化,并活化巨噬细胞以杀的溶血活性随饲料维生素C含量的增加而明显 灭所包围的细菌。真菌甘露寡聚糖是通过发酵法地增高。 Ortuno(1999等用高维生素C的饲料投 从富含甘露寡聚糖(Mos)的酵母细胞壁中提取出喂金头鲷,其呼吸爆炸作用与血清补体活力均呈 来的葡甘露聚糖蛋白复合体。首先,它能选择性现显著提高。我国学者在青石斑鱼的试验中也证 促进动物肠道有益菌如双歧杆菌、乳酸杆菌等的实了上述结果。秦启伟等(2000)在冰冻饲料小杂 大量增殖而使其在胃肠道中形成微生态竞争优鱼中添加不同剂量的维生素C(每kg饵料鱼含量 势,直接抑制了外源菌和肠内固有腐败菌的生长分别为0,500,1000,1500和2000mg),连续投喂 繁殖,从而发挥正常肠道菌群在屏障、营养和免青石斑鱼 Epinephelus awoara20周后,发现其血清 疫上的正常功能。第二,它能阻碍细菌表面外源补体经典型溶解SRBC的能力随饲料维生素C添 凝集素与肠黏膜上皮细胞特异性的糖分子的结加量的提高而显著增强(P<0.01),与只投喂冰 91994-2007ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreservedhttp:/www.cnki.net
—!"— !##$ 年第 ! 期 江西饲料 多糖的结构不同，%&’ 由 ( 个重要的亚单位，包括 )—特异性侧链、核内区域以及最内部的类脂 ) 组成。)—特异性侧链负责生物体的)—抗原特 异性，核内区域以及最内部的类脂化合物 ) 分别 和原生质膜及细胞壁上的糖肽部分相连接。类脂 ) 是葡萄糖苷—氨基葡萄糖复合物，是 %&’ 的内 毒素，在增强动物免疫机制中发挥重要作用。%&’ 能刺激 * 细胞的分化，并能增强鱼类巨噬细胞的 活性+ ’,-,./ 等，"012 3。体外试验中发现，%&’ 能提 高大西洋鲑巨噬细胞过氧化物阴离子的产量，并 增强其噬菌作用 +4567,88 等，"009 3。同样，%&’ 能刺激淋巴细胞中巨噬细胞活化因子 +:);3 的 产生 +4567,88 等，"0093 以及鲍鱼单核细胞中细 胞介素—" 类分子的产生，而给鲽鱼的腹膜注射 %&’ 后鲽鱼的巨噬细胞的移动性提高+’,<,/"0003。 ( 多糖 (= " 几丁质+>?/./83 几丁质是来源于甲壳类和昆虫外骨骼或某 些真菌类的细胞壁的一种多糖，给虹鳟注射几丁 质后激活巨噬细胞活性，增强其抗 @/AB/C ,8D6/-E -,B67 的感染力。给黄尾鱼注射几丁质可增强其 抗巴斯德菌 +&,-F.56B5--, G/FH/H/I, 3 的感染能力， 但给鼠或猪注射几丁质却没有增加非特异免疫 机制活性。脱乙胺几丁质+>?/8.CF,83也具有免疫 刺激物的作用，给虹鳟注射或浸浴脱乙胺几丁质 可增强虹鳟对 )= F,-7C8/H/I, 感染的抵抗力。)8E I5BFC8+"009 3 报道，注射了脱乙胺几丁质的虹鳟 因体液中抗体浓度提高及吞噬细胞杀菌能力增 强而增加了抗线虫的感染能力。 (= ! 甘露寡聚糖 寡聚糖也可以增加鱼的免疫细胞释放细胞 因子，使 J 细胞增殖分化，并活化巨噬细胞以杀 灭所包围的细菌。真菌甘露寡聚糖是通过发酵法 从富含甘露寡聚糖+:K’3的酵母细胞壁中提取出 来的葡甘露聚糖蛋白复合体。首先，它能选择性 促进动物肠道有益菌如双歧杆菌、乳酸杆菌等的 大量增殖而使其在胃肠道中形成微生态竞争优 势，直接抑制了外源菌和肠内固有腐败菌的生长 繁殖，从而发挥正常肠道菌群在屏障、营养和免 疫上的正常功能。第二，它能阻碍细菌表面外源 凝集素与肠黏膜上皮细胞特异性的糖分子的结 合，而阻止病原菌在胃肠道的粘接和定植，使其 最终随粪便排出体外。第三，它能够刺激免疫反 应。免疫刺激包括佐剂和免疫调节效应两个方 面。酵母细胞壁具有很强的抗原激活特性，所以 甘露寡聚糖在刺激机体免疫应答上起到一定的 作用，而且它能与一定毒素、病毒和真核细胞的表 面结合而作为这些外源抗原的佐剂 +)IL6M,8.F3， 能减缓抗原的吸收，增加抗原的效价，从而加强 细胞和体液的免疫性。此外，它也可通过刺激肝 脏分泌甘露糖结合蛋白而影响免疫系统，这种蛋 白质能与细菌夹膜相粘接并触发一连串的补体， 从而启动免疫系统产生应答反应。 $ 维生素 $= " 维生素 > 维生素 > 是动物生长和维持正常生理机能 所必须的营养物质，大多数鸟类和哺乳动物能利 用葡萄糖醛酸合成维生素 >，但许多水产动物则 不能合成，必须从食物中获得。维生素 > 对鱼类 的体液免疫和非特异性细胞免疫均具有一定的 影响，因而在鱼饲料中添加维生素 > 能够增强其 免疫功能，提高抗病能力和存活率。’H?7/I. +"0023 报道，维生素 > 是动物正常免疫机能所必 需的，但它并不是直接起作用，而是与一些抗氧 化物质如维生素 N 和对机体有防御机能的金属 元素铁、铜等的运输有协同作用。@5B-?,H +"001 3 等发现高维生素 >+(###7D O <D 3 含量的饲料能显 著提高虹鳟的溶菌酶活性。国外有关维生素 > 与 鱼类免疫机制间关系的研究表明，在饲料中添加 维生素 > 能够明显影响鱼类补体的抗体依赖性 溶血活动。P,BI/5 等 +"00" 3 对大西洋鲑 ’,-7C F,-,B 的研究也有类似的结果，大西洋鲑血清补体 的溶血活性随饲料维生素 > 含量的增加而明显 地增高。KB.68C +"000 3 等用高维生素 > 的饲料投 喂金头鲷，其呼吸爆炸作用与血清补体活力均呈 现显著提高。我国学者在青石斑鱼的试验中也证 实了上述结果。秦启伟等+!###3在冰冻饲料小杂 鱼中添加不同剂量的维生素 >+每 <D 饵料鱼含量 分别为 #，9##，"###，"9## 和 !###7D 3，连续投喂 青石斑鱼 NG/85G?5-6F ,QC,B,!# 周后，发现其血清 补体经典型溶解 ’R*> 的能力随饲料维生素 > 添 加量的提高而显著增强 + ! S #= #" 3，与只投喂冰 水 产 养 殖
2004年第2期 江西饲料 水产养殖 冻小杂鱼的对照组相比,添加量为2000ng/kg组补体活力,从而对鱼类免疫功能产生影响 鱼的溶血活性提高1倍多,但维生素C对血清的5乳铁蛋白 杀菌活性却没有作用。维生素C对补体活性的影 乳铁蛋白( Lactoferrin)是一种广泛分布于家 响可能与CI的合成有关。当维生素C是正常生畜乳液中的铁结合糖蛋白,其分子量为87kd,由 长需求量的100倍时,能显著提高血浆Clq的含一条肽链构成,有四个铁结合位点,是一种抗氧 量,而Clq是CI的一个组成成分,CI是激活经典化剂,有助于调节铁吸收和吞噬细胞生长。其抗 补体途径的第一个补体成分。对经典补体途径的病机制与它和铁的结合特性有关,因为病原菌的 激活可能需要高剂量的维生素C,并需要长时间毒性与其从环境中所获取的铁离子有关(铁离子 的添加( Velha等,1996) 对细菌中生物氧化酶是必需的),而乳铁蛋白则 4.2维生素E 通过竞争Fe3而抑制细菌生长。有实验证明,乳铁 维生素E也是鱼类重要的营养物质,其主要蛋白对大肠杆菌、链球菌、肺炎杆菌、枯草杆菌、 功能为抗氧化,保护脂溶性细胞膜和不饱和脂肪葡萄球菌等均有抑制作用。它能刺激鱼的巨噬细 酸不被氧化,饲料中适量添加,可以作为免疫增胞产生OⅡ和提高粒细胞、嗜中性白细胞的活 强物质,强化吞噬细胞的生成,加强吞噬作用。 性。给虹鳟和提高粒细胞、嗜中性白细胞的活 Hardie等(1990)认为,不添加维生素E组的性。给虹鳟口服牛的乳铁蛋白后,其巨噬细胞的 大西洋鲑鱼补体活力受到损害,死亡率显著高于吞噬作用增强,产生的超氧化物阴离子增多,抗 添加组,巨噬细胞吞噬细菌的能力下降。随着饲 Vibrio anguillarum的感染力提高。口服了乳铁蛋 料中维生素E水平的升高,虹蹲红细胞对氢过氧白的真鲷血小板释放的凝集素增多。 化氢诱导溶血的抗性增强。红细胞膜的稳定性亦 化学药物治疗是目前最主要的疾病防治方 增加:维生素E和其他细胞抗氧化剂的需要依赖法,但是由于生产中抗生素等化学药物普遍使用 于内源性和外源性游离自由基的产生以及细胞或使用不当,使得抗生素的耐药菌株不断增加, 膜中可氧化脂肪的浓度,饲料中补充维生素E促动物细胞免疫、体液免疫功能下降,药物在水产 进巨噬细胞的吞噬活力,增强虹蹲对细菌病原体品中的残留威胁到人体的健康和安全。接种疫苗 的免疫力(wise等,1993)。饲料中添加维生素E是水产养殖中预防疾病的有效措施,可是,由于 可以提高虹蹲鱼抗 Y ruckeri抗体的产生,以及大免疫反应具有特异性,一种疫苗只能特异性地预 比目鱼巨噬细胞的活性( Puisford,1995),但是不防相应的某种疾病,对其他的疾病是没有预防作 能影响大西洋鲑鱼的体液抗体免疫反应,对免疫用的。而且,现阶段疫苗的制备及其在实际生产 刺激和肾脏细菌性疾病无抵抗作用。 Alerton中的广泛应用仍存在着困难。因此,仅仅通过疫 (2001)等以含适量维生素E的饲料投喂虹鳟,可苗来防治所有的鱼类疾病是不可能的。使用免疫 增强吞噬细胞的噬菌作用 增强剂可以弥补化学药物和疫苗的不足,因为免 4.3维生素A 疫增强剂比化学药物的安全性高,比疫苗的应用 维生素A对维持鱼类免疫系统正常功能是范围广。另外,免疫增强剂和疫苗的混合使用也 必需的。最近研究表明,大西洋鲑鱼和虹鳟摄入能増强疫苗的疗效。大量的硏究表明,在鲑鱼、鲶 维生素A能影响体液和细胞免疫功能。用缺乏维鱼等鱼类中应用葡聚糖、肽聚糖等免増强剂能够 生素A的饲料饲喂虹蹲和大西洋鲑,鱼血淸抗蛋起到促进生长、提高存活率和抗病能力作用。随 白酶活力、肾脏白细胞游走活力和巨噬细胞吞噬着对免疫增强剂的使用方法、剂量和期限以及对 能力降低。鱼类的抗蛋白酶在中和细菌病原体产鱼类免疫机制的研究进一步深入,免疫增强剂将 生的胞外蛋白酶方面起着重要作用,尤其是a2 会成为控制鱼类疾病,提高免疫力的有效途径。 巨球蛋白具有保护鲑科鱼类免受A. Salmonicida目前,通过多来源、多途径的方式开发低毒、高 细菌感染能力。饲料中高水平的维生素A能提高效、速效、长效的新型免疫增强剂已成为鱼类疾 鱼体淋巴细胞吞噬能力和血清溶菌酶及特异性疾防治的发展趋势。 o1994-2007 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved //www.cnkinet
!""# 年第 ! 期 江西饲料 —!!— 冻小杂鱼的对照组相比，添加量为 !"""$% & ’% 组 鱼的溶血活性提高 ( 倍多，但维生素 ) 对血清的 杀菌活性却没有作用。维生素 ) 对补体活性的影 响可能与 )* 的合成有关。当维生素 ) 是正常生 长需求量的 ("" 倍时，能显著提高血浆 )*+ 的含 量，而 )*+ 是 )* 的一个组成成分，)* 是激活经典 补体途径的第一个补体成分。对经典补体途径的 激活可能需要高剂量的维生素 )，并需要长时间 的添加,-./012 等，(334 5。 #6 ! 维生素 7 维生素 7 也是鱼类重要的营养物质，其主要 功能为抗氧化，保护脂溶性细胞膜和不饱和脂肪 酸不被氧化，饲料中适量添加，可以作为免疫增 强物质，强化吞噬细胞的生成，加强吞噬作用。 819:;. 等 ,(33" 5 认为，不添加维生素 7 组的 大西洋鲑鱼补体活力受到损害，死亡率显著高于 添加组，巨噬细胞吞噬细菌的能力下降。随着饲 料中维生素 7 水平的升高，虹蹲红细胞对氢过氧 化氢诱导溶血的抗性增强 。红细胞膜的稳定性亦 增加；维生素 7 和其他细胞抗氧化剂的需要依赖 于内源性和外源性游离自由基的产生以及细胞 膜中可氧化脂肪的浓度，饲料中补充维生素 7 促 进巨噬细胞的吞噬活力，增强虹蹲对细菌病原体 的免疫力 ,<;=. 等，(33>5。饲料中添加维生素 7 可以提高虹蹲鱼抗 !" #$%&’#( 抗体的产生，以及大 比目鱼巨噬细胞的活性 ,?@;=AB9:C (33D 5，但是不 能影响大西洋鲑鱼的体液抗体免疫反应，对免疫 刺激和肾脏细 菌性疾病无抵抗作用。 )/.9EBF ,!""(5 等以含适量维生素 7 的饲料投喂虹鳟，可 增强吞噬细胞的噬菌作用。 #6 > 维生素 G 维生素 G 对维持鱼类免疫系统正常功能是 必需的。最近研究表明，大西洋鲑鱼和虹鳟摄入 维生素 G 能影响体液和细胞免疫功能。用缺乏维 生素 G 的饲料饲喂虹蹲和大西洋鲑，鱼血清抗蛋 白酶活力、肾脏白细胞游走活力和巨噬细胞吞噬 能力降低。鱼类的抗蛋白酶在中和细菌病原体产 生的胞外蛋白酶方面起着重要作用，尤其是 !! 一 巨球蛋白具有保护鲑科鱼类免受 G6 )*+,-.(%(/* 细菌感染能力。饲料中高水平的维生素 G 能提高 鱼体淋巴细胞吞噬能力和血清溶菌酶及特异性 补体活力，从而对鱼类免疫功能产生影响。 D 乳铁蛋白 乳铁蛋白 ,H12EBA.99;F5 是一种广泛分布于家 畜乳液中的铁结合糖蛋白，其分子量为 IJ’:，由 一条肽链构成，有四个铁结合位点，是一种抗氧 化剂，有助于调节铁吸收和吞噬细胞生长。其抗 病机制与它和铁的结合特性有关，因为病原菌的 毒性与其从环境中所获取的铁离子有关 ,铁离子 对细菌中生物氧化酶是必需的5，而乳铁蛋白则 通过竞争 K.> 而抑制细菌生长。有实验证明，乳铁 蛋白对大肠杆菌、链球菌、肺炎杆菌、枯草杆菌、 葡萄球菌等均有抑制作用。它能刺激鱼的巨噬细 胞产生 L** 和提高粒细胞、嗜中性白细胞的活 性。给虹鳟和提高粒细胞、嗜中性白细胞的活 性。给虹鳟口服牛的乳铁蛋白后，其巨噬细胞的 吞噬作用增强，产生的超氧化物阴离子增多，抗 -;M9;B 1F%@;//19@$ 的感染力提高。口服了乳铁蛋 白的真鲷血小板释放的凝集素增多。 化学药物治疗是目前最主要的疾病防治方 法，但是由于生产中抗生素等化学药物普遍使用 或使用不当，使得抗生素的耐药菌株不断增加， 动物细胞免疫、体液免疫功能下降，药物在水产 品中的残留威胁到人体的健康和安全。接种疫苗 是水产养殖中预防疾病的有效措施，可是，由于 免疫反应具有特异性，一种疫苗只能特异性地预 防相应的某种疾病，对其他的疾病是没有预防作 用的。而且，现阶段疫苗的制备及其在实际生产 中的广泛应用仍存在着困难。因此，仅仅通过疫 苗来防治所有的鱼类疾病是不可能的。使用免疫 增强剂可以弥补化学药物和疫苗的不足，因为免 疫增强剂比化学药物的安全性高，比疫苗的应用 范围广。另外，免疫增强剂和疫苗的混合使用也 能增强疫苗的疗效。大量的研究表明，在鲑鱼、鲶 鱼等鱼类中应用葡聚糖、肽聚糖等免增强剂能够 起到促进生长、提高存活率和抗病能力作用。随 着对免疫增强剂的使用方法、剂量和期限以及对 鱼类免疫机制的研究进一步深入，免疫增强剂将 会成为控制鱼类疾病，提高免疫力的有效途径。 目前，通过多来源、多途径的方式开发低毒、高 效、速效、长效的新型免疫增强剂已成为鱼类疾 疾防治的发展趋势。 水 产 养 殖