实验四、水中“三氮”的测定 一、实验目的 1.了解三氮”测定的原理及方法 2.掌握“三氮的卫生学意义 二、实验原理 (1)氨氮测定原理 在碱性溶液中，氨与纳氏试剂(KHg4)反应生成淡黄至棕色的络合物 (Hg2ONHI),在一定条件下，其发色强度与氨氮含量成正比。 (2)亚硝酸盐氮测定原理 在pH1.7以下亚硝酸盐与对氨基苯磺酰胺起重氮化作用，再与盐酸N-(1-萘基)- 乙烯二胺发生偶合反应，生成紫红色的偶氮染料，于540m波长处测量吸光度。 (3)硝酸盐氮测定原理 在浓硫酸条件下，硝酸盐与马钱子碱作用，呈现玫瑰红色，并迅速变为黄色。 三、实验重点、难点 重点： “三氮”的卫生学意义 难点： 1.氨氮的测定原理及方法 2.亚硝酸盐氮的测定原理及方法 四、实验方式 讲解实验目的、原理、方法、结果计算、讨论内容及注意事项 课堂总结 学生操作 五、实验设备及试剂 仪器：500mL全玻璃蒸馏器、50mL具塞比色管、分光光度计。 试剂：无氨蒸馏水，氨氮标准贮备溶液(10.0μg/L),0.35%硫代硫酸钠 溶液，磷酸盐缓冲溶液，纳氏试剂（碱性碘化汞钾溶液），硼酸溶液(20g
/L),2%硼酸溶液，10%硫酸锌溶液，酒石酸钾钠溶液(500g/L),亚 硝酸盐氮标准溶液(0.1ug/L),氢氧化铝悬浮液，对氨基苯磺酰胺 溶液(10g/L),盐酸N-(1-萘基)-乙烯二胺(1g/L),浓硫酸。 六、实验步骤 方法步骤 (1)氨氮测定 ● 水样预处理：无色澄清水样可直接测定：色、浊度高或含干扰物质的水样需 经蒸馏或混凝沉淀处理。 ● 取样：水样50.0ml于50ml比色管中：氨氮含量超过0.1mg需用纯水稀释； 标准管：50ml比色管10支，分别加入氨氮标准液0.00,0.10,0.30,0.50， 0.70,1.00,3.00,5.00,7.00及10.00ml,用纯水稀释至50ml（含量分别为0， 1,3,5,7,10,30,50,70,100ug): ● 加试剂：各管加入1.0mL酒石酸钾钠溶液，弃分摇匀。再加入1.0mL纳氏试剂， 混匀后，放置10min,于420nm波长，1cm比色皿，以蒸馏水作参比，测定吸光度： 如氨氮含量低于30ug,改用3cm比色皿l;低于10μg的氨氮可用目视比色。 绘制标准曲线：作图，或用计算器计算相关回归方程，查出或计算出样品管 中氨氨含量，或目视比色记录水样中相当于标准管的含量。 ●】 计算 C=M/V C:水样中氨氮的含量，mg/L: M:从校准曲线上查得样品管中氨氮的含量，ug: V:水样体积，mL (2)亚硝酸盐氮测定 ● 取样：取澄清水样50.0mL置于比色管中，调pH约为7（若水样浑浊，可用 孔径0.45um的滤膜过滤。若水中亚硝酸盐含量高时，可少取水样稀释至50mL)。 标准管：吸取0,0.50,1.00,2.50,5.00,7.50和10.00及12.50mL亚硝酸 盐标准溶液于一组50mL比色瓶中，用纯水稀释至50mL。 加试剂：向水样管及标准管各加1.0mL对氨基苯磺酰胺溶液，摇匀后放置2~ 8min,加1.0mL盐酸N-(1-萘基)-乙烯二胺溶液，立即摇匀，至少放置10min, 但不要超过2h。 以试剂空白作参比，用1cm比色杯，在540nm波长处测量吸光度