细胞周期中不同时相及其主要事件 G1期 ·与DNA合成启动相关,开始合成细胞生长所需要的多种蛋 白质、RNA、碳水化合物、脂等,同时染色质去凝集 S期 ·DNA复制与组蛋自合成同步,组成核小体串珠结构 ·S期DNA合成不同步 G2期 DNA复制完成,在G2期合成一定数量的蛋白质和RNA分子 M期 ·M期即细胞分裂期,真核细胞的细胞分裂主要包括两种方 式,即有丝分裂( mi tosis)和减数分裂( meioSIs)。遗传物 质和细胞内其他物质分配给子细胞
11 细胞周期中不同时相及其主要事件 G1期 与DNA合成启动相关，开始合成细胞生长所需要的多种蛋 白质、RNA、碳水化合物、脂等，同时染色质去凝集。 S 期 DNA复制与组蛋白合成同步，组成核小体串珠结构 S期DNA合成不同步 G2期 DNA复制完成，在G2期合成一定数量的蛋白质和RNA分子 M 期 M期即细胞分裂期，真核细胞的细胞分裂主要包括两种方 式，即有丝分裂(mitosis)和减数分裂(meiosis)。遗传物 质和细胞内其他物质分配给子细胞
细胞周期长短测定 嗯脉冲标记DNA复制和细胞分裂指数观察测定法 ·对测定细胞进行脉冲标记、定时取材、利用放射自显影 技术显示标记细胞,通过统计标记有丝分裂细胞百分数 的办法来测定细胞周期 嗯流式细胞仪测定法( Flow Cytometry) 嗯缩时摄像技术,可以得到准确的细胞周期时间及分 裂间期和分裂期的准确时间
12 细胞周期长短测定 脉冲标记DNA复制和细胞分裂指数观察测定法 对测定细胞进行脉冲标记、定时取材、利用放射自显影 技术显示标记细胞，通过统计标记有丝分裂细胞百分数 的办法来测定细胞周期。 流式细胞仪测定法(Flow Cytometry) 缩时摄像技术，可以得到准确的细胞周期时间及分 裂间期和分裂期的准确时间
细胞周期同步化 嗯细胞同步化 synchronization)是指在自然过程中发生 或经人为处理造成的细胞周期同步化,前者称自然同步 化,后者称为人工同步化。 1.自然同步化: 种粘菌的变形体 plasmodia:如粘菌只进行核分 裂,而不发生胞质分裂,形成多核体。数量众多的核 处于同一细胞质中,进行同步化分裂,使细胞核达108 体积达5~6cm。疟原虫也具有类似的情况。 2.人工选择同步化 3.药物诱导法
13 细胞周期同步化 细胞同步化(synchronization)是指在自然过程中发生 或经人为处理造成的细胞周期同步化，前者称自然同步 化，后者称为人工同步化。 1.自然同步化： 一种粘菌的变形体plasmodia：如粘菌只进行核分 裂，而不发生胞质分裂，形成多核体。数量众多的核 处于同一细胞质中，进行同步化分裂，使细胞核达108 ， 体积达5~6cm。疟原虫也具有类似的情况。 2.人工选择同步化 3.药物诱导法
人工选择同步化 有丝分裂选择法: 有丝分裂选择法:使单层培养的细胞处于对数增殖期,此 时分裂活跃,M高。有丝分裂细胞变圆隆起,与培养皿的 附着性低,此时轻轻振荡,M期细胞脱离器壁,悬浮于培 养液中,收集培养液,再加入新鲜培养液,依法继续收集 则可获得一定数量的中期细胞。其优点是,操作简单,同 步化程度高,细胞不受药物伤害,缺点是获得的细胞数量 较少。 嗯密度梯度离心法: 不同时期的细胞体积不同,而细胞在给定离心场中沉降的 速度与其半径的平方成正比,因此可用离心的方法分离。 其优点是可用于任何悬浮培养的细胞,缺点是同步化程度 较低
14 人工选择同步化 有丝分裂选择法： 有丝分裂选择法：使单层培养的细胞处于对数增殖期，此 时分裂活跃，MI高。有丝分裂细胞变圆隆起，与培养皿的 附着性低，此时轻轻振荡，M期细胞脱离器壁，悬浮于培 养液中，收集培养液，再加入新鲜培养液，依法继续收集， 则可获得一定数量的中期细胞。其优点是，操作简单，同 步化程度高，细胞不受药物伤害，缺点是获得的细胞数量 较少。 密度梯度离心法： 不同时期的细胞体积不同，而细胞在给定离心场中沉降的 速度与其半径的平方成正比，因此可用离心的方法分离。 其优点是可用于任何悬浮培养的细胞，缺点是同步化程度 较低
药物诱导法 嗯DNA合成阻断法 选用DNA合成的抑制剂,可逆地抑制DNA合成,而不影响 其他时期细胞的运转,最终可将细胞群阻断在S期或G/S交 界处。5-氟脱氧尿嘧啶、羟基脲、阿糖胞苷、氨甲蝶呤 高浓度ADR、GDR和TDR,均可抑制DNA合成使细胞同 步化。优点是同步化程度高,适用于任何培养体系。可将 几乎所有的细胞同步化。缺点是产生非均衡生长,个别细 胞体积增大。 嗯分裂中期阻断法 通过抑制微管聚合来抑制细胞分裂器的形成,将细胞阻断 在细胞分裂中期。优点是操作简便,效率高。缺点是这些 药物的毒性相对较大
15 药物诱导法 DNA合成阻断法 选用DNA合成的抑制剂，可逆地抑制DNA合成，而不影响 其他时期细胞的运转，最终可将细胞群阻断在S期或G/S交 界处。5-氟脱氧尿嘧啶、羟基脲、阿糖胞苷、氨甲蝶呤、 高浓度ADR、GDR和TDR，均可抑制DNA合成使细胞同 步化。优点是同步化程度高，适用于任何培养体系。可将 几乎所有的细胞同步化。缺点是产生非均衡生长，个别细 胞体积增大。 分裂中期阻断法 通过抑制微管聚合来抑制细胞分裂器的形成，将细胞阻断 在细胞分裂中期。优点是操作简便，效率高。缺点是这些 药物的毒性相对较大