Chapter 3 The Extraction, Separation and Purification of Enzyme 酶的分离纯化 ●●● 制作:郑穗平
Chapter 3 The Extraction, Separation and Purification of Enzyme 酶的分离纯化 制作：郑穗平
●● ●●●●● ●●●● ●●●● Contents of chapter 3 ●●●● 1、酶的提取与分离纯化技术路线 ∞2、细胞破碎 ∞3、酶的提取 4、酶的分离方法 Go 酶的组合分离纯化策略 6、酶的浓缩、干燥与结晶
Contents of chapter 3 1、酶的提取与分离纯化技术路线 2、细胞破碎 3、酶的提取 4、酶的分离方法 Go Go Go Go Go 5、酶的组合分离纯化策略 Go 6、酶的浓缩、干燥与结晶
●● ●●●●● ●●●● ●●●● 细胞结构与酶分布 ●●●● Plant Cell Structure Cell Plasma chloroplast me mbrane Plasmo- Central vacuole Mitochondrion Bacterial Cell Structure Ribosomes Lysosome Pili Golgi Nuclear DNA apparatus Ribosomes Nucleus Rough Nucleolus endoplasmi Smooth→ reticulum Flagellum endoplasmIc Cytoplasm reticulum Animal Cell Structure Capsule Golgi Microvilli apparatus Plasma Cell wall membrane Plasma Centriole membrane Smooth endoplasmic lysosome Nuclear envelope Mitochon- drion Rou plasm Nucleus reticule Cytoplasm
细胞结构与酶分布
●● ●●●●● ●●●● ●●●● 3.1酶的提取、分离纯化技术路线 ●●●● 细胞破碎动物、植物或微生物细胞 酶提取 发酵液 酶分离纯化 酶浓缩 离心分离,过滤分离,沉淀分 酶贮存 离,层析分离,电泳分离,萃 取分离,结晶分离等
3.1 酶的提取、分离纯化技术路线 细胞破碎 酶提取 酶分离纯化 酶浓缩 酶贮存 动物、植物或微生物细胞 发酵液 离心分离，过滤分离，沉淀分 离，层析分离，电泳分离，萃 取分离，结晶分离等
A純化階段 B分析方法 酶分离纯化不同阶段 Material Background knowledge about Mat erial 酶的纯化过程,约可分为 Extraction Protein/ Adivity assay 三个阶段: Protein (1)粗蛋白质( crude Electrophoresis fractionation Native-PAGE protein):采样→均质 Ampniumsulate SDS-PAGE okrent Gradient PAGe 打破细胞→抽出全蛋白 多使用盐析沉淀法;可以 Chromatography Kinetic study Mol ecular weight Sedimentation coeffi cent 粗略去除蛋白质以外的物 determinati on 州 finity chomatography 质 FPLC Quaternary structure 月. ElectrophoresIs Isoelectric focusing Pepti de mapping (2)部分纯化 (partially purified): Amino acid analysis 初步的纯化,使用各钟柱 Pure enzyme Amino acid sequencing Extinct on coefficient 层析法。 Antibody production iMmunoassays: (3)均质酶 Monocbral or conrentional antibodies Immunoblotting 2 ELISA ( homogeneous):目标酶 X-Ray Double diffusion Crystal 的进一步精制纯化,可用 crystallography Irmmunoeledropharesis 制备式电泳或HPLC Spectroscopic methods CD, ORD, NMR& ESR
酶的纯化过程，约可分为 三个阶段： (1) 粗蛋白质 (crude protein): 采样 → 均 质 打破细胞 → 抽出全蛋白， 多使用 盐 析沉淀 法；可以 粗略去除蛋白质以外的物 质。 (2) 部分纯化 (partially purified): 初步的纯化，使用各钟 柱 层析法 。 (3) 均质酶 (homogeneous): 目标酶 的进一步精制纯化，可用 制备 式电泳 或 HPLC 。 酶分离纯化不同阶段 本章 目录