碱变性法基本原理在pH12.0-12.6碱性环境中,线性的大分子量细菌染色体DNA变性,而共价闭环质粒DNA仍为自然状态。将PH调至中性并有高盐浓度存在的条件下,染色体DNA之间交联形成不溶性网状结构,大部分DNA和蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀,而质粒DNA仍为可溶状态,通过离心可除去大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质,质粒DNA尚在上清中,再用酚氯仿抽提进一步纯化质粒DNA
碱变性法基本原理 在pH 12.0-12.6碱性环境中,线性的大分子量细菌 染色体DNA变性,而共价闭环质粒DNA仍为自然状 态。 将PH调至中性并有高盐浓度存在的条件下,染色体 DNA之间交联形成不溶性网状结构,大部分DNA和 蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀,而质粒 DNA仍为可溶状态,通过离心可除去大部分细胞碎 片、染色体DNA、RNA及蛋白质,质粒DNA尚在上 清中,再用酚氯仿抽提进一步纯化质粒DNA
实验试剂LB培养基10g胰化蛋白陈定容7.5酵母提取物5g1000mlpH10gNaCl.STE:NaCl0.1M10mMTris HCl(pH8.0)1mMEDTAAmP50mg/ml溶菌酶10mg/ml(用10mMTris·HClpH8.0新鲜配制
实验试剂 LB培养基: 胰化蛋白胨 10g 酵母提取物 5g 定容 1000ml pH 7.5 NaCl 10g STE: 0.1M NaCl 10mM Tris HCl(pH8.0) 1mM EDTA AmP 50mg/ml 溶菌酶 10mg/ml (用10mM Tris·HCl pH8.0新鲜配制)
试剂溶液I:50mM葡萄糖25mMTris·HCI(pH8.0)10mMEDTA溶液工:(新鲜配制)0.2NNaOH1%SDS溶液Ⅱ:5MKAC10ml冰醋酸11.5ml水28.5ml酚,氯仿,乙醇RNase琼脂糖TE:1mMEDTA10mMTris-HCl(pH8.0)
试剂 溶液Ⅰ: 50mM 葡萄糖 25mM Tris·HCl(pH8.0) 10mM EDTA 溶液Ⅱ:(新鲜配制) 0.2N NaOH 1% SDS 溶液Ⅲ: 5M KAC 10ml 冰醋酸 11.5ml 水 28.5ml 酚,氯仿,乙醇 RNase 琼脂糖 TE: 10mM Tris-HCl(pH8.0) 1mM EDTA