质粒类型质粒按复制方式分为两种类型,松弛型质粒和严紧型质粒1.松弛型质粒松弛型质粒的复制不需要质粒编码的功能蛋白完全依赖于宿主提供的半衰期较长的酶。即使蛋白质合成受抑制,质粒的复制依然进行。当抑制蛋白质合成并阻断细菌染色体复制的氯霉素等抗生素存在时,质粒的拷贝数可达2000-3000拷贝
质粒类型 质粒按复制方式分为两种类型: 松弛型质粒 和 严紧型质粒 1.松弛型质粒 松弛型质粒的复制不需要质粒编码的功能蛋白, 完全依赖于宿主提供的半衰期较长的酶。即使蛋白 质合成受抑制,质粒的复制依然进行。当抑制蛋白 质合成并阻断细菌染色体复制的氯霉素等抗生素存 在时,质粒的拷贝数可达2000-3000拷贝
2.严紧型质粒严紧型质粒复制需要一个质粒编码的蛋白质粒的拷贝数不能通过用氯霉素等蛋白合成抑制剂来增加
2.严紧型质粒 严紧型质粒复制需要一个质粒编码的蛋白, 质粒的拷贝数不能通过用氯霉素等蛋白合成 抑制剂来增加
质粒的应用大多数基因工程使用松弛型质粒严紧型质粒用来表达一些可使宿主细胞受毒害致死的基因。质粒的特点使质粒成为携带外源基因进入细菌中扩增或表达的重要媒介物,这种基因运载工具在基因工程中具有极广泛的应用价值
质粒的应用 大多数基因工程使用松弛型质粒。 严紧型质粒用来表达一些可使宿主细胞受毒 害致死的基因。 质粒的特点使质粒成为携带外源基因进入细 菌中扩增或表达的重要媒介物,这种基因运 载工具在基因工程中具有极广泛的应用价值
本实验目的本实验要求掌握最常用的质粒的提取方法
本实验目的 本实验要求掌握最常用的质粒的提取方法
分离质粒DNA方法从大肠杆菌中分离质粒DNA方法众多,目前常用的碱变性法;煮沸法:SDS法;羟基磷灰石层析法等各方法分离是依据宿主菌株类型、质粒分子大小、碱基组成及结构等特点加以选择的,其中碱变性法既经济且收得率较高,提取的质粒DNA可用于酶切连接与转化
分离质粒DNA方法 从大肠杆菌中分离质粒DNA方法众多,目前常用的 碱变性法; 煮沸法; SDS法; 羟基磷灰石层析法等 各方法分离是依据宿主菌株类型、质粒分子大小、 碱基组成及结构等特点加以选择的,其中碱变性法 既经济且收得率较高,提取的质粒DNA可用于酶切, 连接与转化