饲料分析及饲料质量检测技术 30分钟,再称重,直至恒重。恒重后,将滤纸包放入索氏抽脂器中,倒入乙醚,浸泡2小时 左右、抽脂4小时(乙醚冷却速度5-6滴/秒)至16小时(2-3滴/秒),加热水浴锅,使水 温保持60℃左右,乙醚在盛醚瓶中蒸发,乙醚蒸气至冷凝管处冷凝为液体,仍流冋浸提管中, 再经虹吸管回流到盛醚瓶中,如此反复循环。直至将脂肪浸提干净(用一张10×10cm的滤纸, 将滤纸包放在滤纸上,待乙醚挥发完后,滤纸上无痕迹就以为脂肪浸提干净。提取完毕后 移去上部的冷凝管,取出样本包,放入称量瓶中,将称量瓶及样本包移入105℃烘箱中,瓶 盖、半开以免醚气燃烧起火。初烘时烘箱门半开,烘3小时,取出放入干燥器中冷却30分钟 称重、记录,直至恒重(小于0.002克),称量瓶及样本包抽脂后失去的重即为脂肪重。 四结果计算: 脂肪%=样本滤纸包及称量瓶抽脂前重105°C-样本滤纸包及称量抽脂后重105C×100% 风干样本重(克) 脂肪重(g) ×100% 风干样本重(g) 实验四 饲料中钙的测定(高锰酸钾法) 实验目的:掌握应用容量法测定饲料中钙含量,并用以测定各种样本的钙含量
饲料分析及饲料质量检测技术 30 分钟，再称重，直至恒重。恒重后，将滤纸包放入索氏抽脂器中，倒入乙醚，浸泡 2 小时 左右、抽脂 4 小时（乙醚冷却速度 5-6 滴/秒）至 16 小时（2-3 滴/秒），加热水浴锅，使水 温保持 60℃左右，乙醚在盛醚瓶中蒸发，乙醚蒸气至冷凝管处冷凝为液体，仍流回浸提管中， 再经虹吸管回流到盛醚瓶中，如此反复循环。直至将脂肪浸提干净（用一张 10×10cm2 的滤纸， 将滤纸包放在滤纸上，待乙醚挥发完后，滤纸上无痕迹就以为脂肪浸提干净。提取完毕后， 移去上部的冷凝管，取出样本包，放入称量瓶中，将称量瓶及样本包移入 105℃烘箱中，瓶 盖、半开以免醚气燃烧起火。初烘时烘箱门半开，烘 3 小时，取出放入干燥器中冷却 30 分钟 称重、记录，直至恒重（小于 0.002 克），称量瓶及样本包抽脂后失去的重即为脂肪重。 四 结果计算： 脂肪%= ( ) 105 105 风干样本重 克 样本滤纸包及称量瓶抽 脂前重 °C − 样本滤纸包及称量抽脂 后重 °C ×100% = 100 ( ) ( ) × g g 风干样本重 脂肪重 % 实验四 饲料中钙的测定（高锰酸钾法） 一 实验目的：掌握应用容量法测定饲料中钙含量，并用以测定各种样本的钙含量。 11
饲料分析及饲料质量检测技术 二、实验原理:样本中有机物质经硝酸和髙氯酸消化(或用硝酸、髙氯酸和浓硫酸消化) 或样本经灰化后用酸处理溶解后,溶液中含有各种盐类,其中也含有钙盐。钙盐与草酸铵作 用,形成白色沉淀,其化学反应如下: CaCl2+(NH)2C2O4→CaC2O4↓(白色)+2NHC1 然后用硫酸溶解草酸钙;再用标准髙锰酸钾溶液滴淀与钙结合的草酸量,根据髙锰钾用 量,可计算样本中钙量。其化学反应式如下: CaC204+H2S04-CaSO+H2C20 失1个e×2×5 2KMn04 +5H2C 20,+3H2 S0 -10C02+2Mn S0, +8H,0+KSO4 得5个e×2 (氧化还原反应) 三、实验步骤: 1、(1)消化法:①称取2克(0.0001克)风干样本或半干样,放入250m1凯氏烧瓶中 加入20-30-m浓硝酸,将凯氏烧瓶放置电炉上用低温加热(电炉上加放石棉网),使溶液保持 微沸,加热时温度要适当控制,并时刻转动凯氏烧瓶,使烧瓶中消化液在15-25分钟内容积 失去1/3-1/2(如温度太高,消化时间不到15分钟可使瓶内溶液减少1/3-1/2原容积)。② 当消化至规定时间,如发现烧瓶中很少棕色气体逸出,且凯氏烧瓶的球部也无气体积聚时, 即可认为样本中有机物已氧化完毕(若烧瓶壁附有样本炭粒,应及时摇荡烧瓶,使碳粒被消 化液冲下而氧化)。③硝酸消化液结束冷却后,加10m1(或适当减少70-72%过氯酸HClO4(注 意:必须等待凯氏烧瓶冷却,并将烧瓶离开火源后,才可加入过氯酸,因过氯酸易于爆炸) ④将烧瓶放在高温上(500瓦电炉,不加石棉网)消化,直至消化液呈无色清液为止,再继 续加热2一3分钟即告结束。不能烧干(危险!)。⑤待烧瓶冷却,加入少量蒸馏水冲淡,过滤 入250m1容量瓶内,冲烧瓶5-6次并过滤到250ml容量瓶内,加水冲至容量瓶刻度处,混合均 匀,备用。⑥同时进行试剂空白试验。 (2)灰化法:称取2克粉碎风干或半干样本放入坩埚中烧灼,参照样本灰分测定法(或 用已测定灰分的样本)。在残灰中加40m1(1+3)的HCl和数滴浓(5~6)滴浓HNVO3煮沸随即滤入 250m1容量瓶中,以热蒸馏水洗涤坩埚和漏斗的滤纸。滤液冷却至室温后,冲淡至容量瓶刻度 处,混合均匀,备用。同时进行试剂空白试验 2、草酸钙的沉淀 ①用移液管准确吸取灰化法制备的样本液5oπl(溶液取量)决定于样本中钙的容量,以
饲料分析及饲料质量检测技术 二、实验原理：样本中有机物质经硝酸和高氯酸消化（或用硝酸、高氯酸和浓硫酸消化） 或样本经灰化后用酸处理溶解后，溶液中含有各种盐类，其中也含有钙盐。钙盐与草酸铵作 用，形成白色沉淀，其化学反应如下： CaCl2+(NH4)2C2O4→CaC2O4↓（白色）+2NH4Cl 然后用硫酸溶解草酸钙；再用标准高锰酸钾溶液滴淀与钙结合的草酸量，根据高锰钾用 量，可计算样本中钙量。其化学反应式如下： CaC2O4+H2SO4→CaSO4+H2C2O4 失 1 个 e×2×5 2KMn+7O4+5H2C+3 2O4+3H2SO4→10C+4O2+2Mn+2SO4+8H2O+KSO4 得 5 个 e×2 （氧化还原反应） 三、实验步骤： 1、（1）消化法：①称取 2 克（0.0001 克）风干样本或半干样，放入 250ml凯氏烧瓶中， 加入 20-30ml浓硝酸，将凯氏烧瓶放置电炉上用低温加热（电炉上加放石棉网），使溶液保持 微沸，加热时温度要适当控制，并时刻转动凯氏烧瓶，使烧瓶中消化液在 15-25 分钟内容积 失去 1/3-1/2（如温度太高，消化时间不到 15 分钟可使瓶内溶液减少 1/3-1/2 原容积）。② 当消化至规定时间，如发现烧瓶中很少棕色气体逸出，且凯氏烧瓶的球部也无气体积聚时， 即可认为样本中有机物已氧化完毕（若烧瓶壁附有样本炭粒，应及时摇荡烧瓶，使碳粒被消 化液冲下而氧化）。③硝酸消化液结束冷却后，加 10ml（或适当减少 70-72%过氯酸HClO4（注 意：必须等待凯氏烧瓶冷却，并将烧瓶离开火源后，才可加入过氯酸，因过氯酸易于爆炸）。 ④将烧瓶放在高温上（500 瓦电炉，不加石棉网）消化，直至消化液呈无色清液为止，再继 续加热 2－3 分钟即告结束。不能烧干（危险！）。⑤待烧瓶冷却，加入少量蒸馏水冲淡，过滤 入 250ml容量瓶内，冲烧瓶 5-6 次并过滤到 250ml容量瓶内，加水冲至容量瓶刻度处，混合均 匀，备用。⑥同时进行试剂空白试验。 （2）灰化法：称取 2 克粉碎风干或半干样本放入坩埚中烧灼，参照样本灰分测定法（或 用已测定灰分的样本）。在残灰中加 40ml(1+3)的HCl和数滴浓（5～6）滴浓HNO3煮沸随即滤入 250ml容量瓶中，以热蒸馏水洗涤坩埚和漏斗的滤纸。滤液冷却至室温后，冲淡至容量瓶刻度 处，混合均匀，备用。同时进行试剂空白试验。 2、草酸钙的沉淀 ①用移液管准确吸取灰化法制备的样本液 50ml（溶液取量）决定于样本中钙的容量，以 12
饲料分析及饲料质量检测技术 耗用0.05 NKMnO标准液25m1左右为宜,放入250m1三角瓶中。 ②瓶内加入2滴甲基红指示剂,溶液即呈红色。然后一滴滴加入氢氧化铵溶液(1+1) 调节溶液PH至5.6(当溶液电红色转变为桔黄色即可)。 ③加入数滴盐酸(1+3)液,直至溶液又呈红色为止(此时PH为4-4.5)。加蒸馏水冲淡 溶液,使总量约为150ml,然后将溶液加热煮沸(注意勿使溶液外浅)。 ④在热溶液中徐徐滴入热的4.鴒%草酸铵溶液10ml(边搅拌边加)。如溶液由红色转变为 黄色或桔色,再需滴入1-2滴盐酸(1-3)液,直至溶液又转或红色为止 ⑤将溶液煮沸,再在电热板上保温,使溶液草酸钙沉淀颗粒增大,易于分岀。放置溶液 过液,使草酸钙沉淀更完善。 3、草酸钙沉淀的洗涤 用精密定量滤纸(慢速)过滤(每交倾倒滤液只需加满滤纸1/3,否则白色沉淀向上移 至滤纸边缘)。尽量将三角瓶中沉淀分部倒入滤纸中,弃去滤液。用氢氧化铵溶液(1-+50)冲 洗三角瓶及滤纸上的草酸钙沉淀6-8次,直至沉淀中草酸铵洗净为止,测定草酸铵洗净的方 法如下 用试管接滤液2-3m1,在滤液中加硫酸(1+3)3滴,试管加热后,再加高锰酸钾溶液1 滴,如呈微红,30秒后不褪色即可 冲洗沉淀中草酸铵时,应沿滤纸边向下加氢氧化铵液,以使沉淀集中在滤纸中心,每次 加铵液只能加到滤纸的三分之一处,以免沉淀向滤纸的边缘移。每次加氢氧化铵溶液,需待 漏斗中液体滤,净后再加,如此进行,易于洗净沉淀中草酸铵 4、滴定,将滤纸放入原烧杯中,量取10m1(1+3)的硫酸溶液及5oml蒸馏水,再用少量 蒸馏水冲洗烧杯内壁,然后将烧杯加热(电炉)到75-85℃,用0.0500NKO溶液滴定,刚 开始时慢滴入,等Mn2离形成时,再继续滴加KMn0溶液,直至溶液呈微红色,在30秒钟以后 仍不退色时为终点 四、结果计算 样本中钙含量%=(-)xN×00200克)×100% 克)×V2 式中:W一样本重(即样本在灰化时取的风干样本)克 V1=样本灰化后的稀释容量(毫升) V2=测定Ca时样本溶液取量(毫升) V3=滴定样本溶液,KMn01溶液耗量(毫升)
饲料分析及饲料质量检测技术 耗用 0.05NKMnO4标准液 25ml左右为1 宜，放入 250ml三角瓶中。 ②瓶内加入 2 滴甲基红指示剂，溶液即呈红色。然后一滴滴加入氢氧化铵溶液（1+1）， 调节溶液 PH 至 5.6（当溶液电红色转变为桔黄色即可）。 ③加入数滴盐酸（1+3）液，直至溶液又呈红色为止（此时 PH 为 4-4.5）。加蒸馏水冲淡 溶液，使总量约为 150ml，然后将溶液加热煮沸（注意勿使溶液外浅）。 ④在热溶液中徐徐滴入热的 4.2%草酸铵溶液 10ml（边搅拌边加）。如溶液由红色转变为 黄色或桔色，再需滴入 1-2 滴盐酸（1+3）液，直至溶液又转或红色为止。 ⑤将溶液煮沸，再在电热板上保温，使溶液草酸钙沉淀颗粒增大，易于分出。放置溶液 过液，使草酸钙沉淀更完善。 3、草酸钙沉淀的洗涤 用精密定量滤纸（慢速）过滤（每交倾倒滤液只需加满滤纸 1/3，否则白色沉淀向上移 至滤纸边缘）。尽量将三角瓶中沉淀分部倒入滤纸中，弃去滤液。用氢氧化铵溶液（1+50）冲 洗三角瓶及滤纸上的草酸钙沉淀 6-8 次，直至沉淀中草酸铵洗净为止，测定草酸铵洗净的方 法如下： 用试管接滤液 2-3ml，在滤液中加硫酸（1+3）3 滴，试管加热后，再加高锰酸钾溶液 1 滴，如呈微红，30 秒后不褪色即可。 冲洗沉淀中草酸铵时，应沿滤纸边向下加氢氧化铵液，以使沉淀集中在滤纸中心，每次 加铵液只能加到滤纸的三分之一处，以免沉淀向滤纸的边缘移。每次加氢氧化铵溶液，需待 漏斗中液体滤，净后再加，如此进行，易于洗净沉淀中草酸铵。 4、滴定，将滤纸放入原烧杯中，量取 10ml（1+3）的硫酸溶液及 50ml蒸馏水，再用少量 蒸馏水冲洗烧杯内壁，然后将烧杯加热（电炉）到 75-85℃，用 0.0500NKMnO4溶液滴定，刚 开始时慢滴入，等Mn2+离形成时，再继续滴加KMnO4溶液，直至溶液呈微红色，在 30 秒钟以后 仍不退色时为终点。 四、结果计算 样本中钙含量%= 100 ( ) ( ) 0.0200( ) 2 3 0 1 × × − × × × W V V V N V 克 克 % 式中：W——样本重（即样本在灰化时取的风干样本）克 V1=样本灰化后的稀释容量（毫升） V2=测定Ca时样本溶液取量（毫升） V3=滴定样本溶液，KMnO4溶液耗量（毫升） 13
饲料分析及饲料质量检测技术 V=滴定空白溶液,KmO溶液耗量(毫升) N=KmnO溶液当量浓度 系数0.0200即1毫升1 NKMnO溶液相当于0.0200克Ca 实验五 饲料中蛋白质的测定 实验目的:掌握饲料中粗蛋白质测定方法,并测定各种样本的粗蛋白质含量。 、实验原理:饲料中含氮物质包括纯蛋白质和氨化物(氨化物有氨基酸、酰胺、硝酸 盐及铵盐等),两者总称为粗蛋白质。凯氏定氮法的基本原理是用硫酸分解试样中蛋白质与氨 化物,使它们含氮物都转变成氨气,氨气被浓硫酸吸收变为硫酸铵。硫酸铵在浓碱的作用下 放出氨气。通过蒸馏,氨气随汽水顺着冷凝流入硼酸溶液,与之结合成为四硼酸铵,后者用 盐酸标准液滴定,即可测定放岀的氨氮量。根据氮量,乘以特定系数,一般为6.25,即可得 出样本中粗蛋白质含量。上述过程中的化学反应如下: 2CH3 CHNH COOH+13H2S04→(NH4)2S04+6C02↑+12S02↑+16H20 (NH4)2S01+2NaOH→2NH3↑+2H0+Na2S0 4H3 BO3+NH3-NHHB 0+5H2O NHHB,0+HC1+5H20-NHC1+4H3 BO 粗蛋白质测定的消化机理: 有机物质与HSO作用,首先是有机物质被HSO碳化生成碳,碳再与HS04作用生成还原物S02, 而C本身生成CO2↑,SO再还原有机物中的N,还原成NH3↑,而另一部分SO2还原成,雾状的SO2 SO2再与水生成HSO4 、实验步聚: (1)用称量纸在电子分析天平上称取0.4克(准确到0.1毫克)左右样本于100m1洗净 烘干的凯氏烧瓶中,加无水硫酸钠(钾)2.5克硫酸铜0.2克,及浓硫酸151,浸泡过液或 加玻璃珠2粒,以防消化时液体溅出。 (2)在凯氏瓶上加一个小漏斗,将凯氏瓶瓶放在有消化架的电炉上小火加热,以免瓶内 产生大量泡沫溢岀瓶口,等泡沫停止产生后,再加强火力,必要时经常转动烧瓶,使全部样 品浸入硫酸内。如有黑泡溅在瓶壁,应待烧瓶冷却后加少量热蒸馏水冲洗之,再继续加热消 化。直至瓶内溶液澄清,消化才告完毕。(约需2-3小时),应在毒气柜中进行)
饲料分析及饲料质量检测技术 V0=滴定空白溶液，KmnO4溶液耗量（毫升） N=KmnO4溶液当量浓度 系数 0.0200即1毫升 1NKMnO4溶液相当于 0.0200 克Ca。 实验五 饲料中蛋白质的测定 一、实验目的：掌握饲料中粗蛋白质测定方法，并测定各种样本的粗蛋白质含量。 二、实验原理：饲料中含氮物质包括纯蛋白质和氨化物（氨化物有氨基酸、酰胺、硝酸 盐及铵盐等），两者总称为粗蛋白质。凯氏定氮法的基本原理是用硫酸分解试样中蛋白质与氨 化物，使它们含氮物都转变成氨气，氨气被浓硫酸吸收变为硫酸铵。硫酸铵在浓碱的作用下 放出氨气。通过蒸馏，氨气随汽水顺着冷凝流入硼酸溶液，与之结合成为四硼酸铵，后者用 盐酸标准液滴定，即可测定放出的氨氮量。根据氮量，乘以特定系数，一般为 6.25，即可得 出样本中粗蛋白质含量。上述过程中的化学反应如下： 2CH3CHNH2COOH+13H2SO4→（NH4）2SO4+6CO2↑+12SO2↑+16H2O （NH4）2SO4+2NaOH→2NH3↑+2H2O+Na2SO4 4H3BO3+NH3→NH4HB4O7+5H2O NH4HB4O7+HCl+5H2O→NH4Cl+4H3BO3 粗蛋白质测定的消化机理： 有机物质与H2SO4作用，首先是有机物质被H2SO4碳化生成碳，碳再与H2SO4作用生成还原物SO2， 而C本身生成CO2↑，SO2再还原有机物中的N，还原成NH3↑，而另一部分SO2还原成，雾状的SO3， SO3再与水生成H2SO4。 三、实验步聚： （1）用称量纸在电子分析天平上称取 0.4 克（准确到 0.1 毫克）左右样本于 100ml 洗净 烘干的凯氏烧瓶中，加无水硫酸钠（钾）2.5 克硫酸铜 0.2 克，及浓硫酸 15ml，浸泡过液或 加玻璃珠 2 粒，以防消化时液体溅出。 （2）在凯氏瓶上加一个小漏斗，将凯氏瓶瓶放在有消化架的电炉上小火加热，以免瓶内 产生大量泡沫溢出瓶口，等泡沫停止产生后，再加强火力，必要时经常转动烧瓶，使全部样 品浸入硫酸内。如有黑泡溅在瓶壁，应待烧瓶冷却后加少量热蒸馏水冲洗之，再继续加热消 化。直至瓶内溶液澄清，消化才告完毕。（约需 2-3 小时），应在毒气柜中进行）。 14
饲料分析及饲料质量检测技术 (3)待烧瓶冷却后加蒸馏水约20m摇匀,然后将烧瓶中溶液无损地转移到100m洗净 的溶量瓶中,用蒸馏水冲洗凯氏烧瓶5-6次(约10ml/次),洗液亦注入容量瓶内,冷却后, 再用蒸馏水稀释至容量瓶刻度,混匀后供测定氮用。 (4)同时作空白,不加样品,只加纸,其它与样品同样操作。 2、蒸馏:(1)煮沸蒸气发生瓶中蒸馏水,并使蒸气洗涤蒸馏器。(2)用量筒量取10毫 升2%的硼酸溶液加入150毫升或250毫升三角瓶内,再加入甲红——一溴甲酚绿混合指示剂2 滴,置于蒸馏装置的冷凝管下,使管口浸入硼酸(HB04)溶液内。 (3)用10毫升移液管量取10ml样本消化液,从蒸馏装置上的小玻杯中注入反应室,再 用少量蒸馏水冲洗小玻杯(注意如注入蒸馏水过多则反应室温度较低,将使反应室内的液体 溢出,使蒸馏结果偏低),将小玻杯上的棒状玻璃塞塞紧,使之不漏气。 (4)用量筒量取5m1-1oml饱和氢氧化钠溶液注入小玻杯中,小心地轻轻提起棒状玻塞, 使氢氧化钠流入反应室内,(注意不能将棒状玻塞完全提起,以免氨气跑掉),立刻将玻塞盖 紧,加蒸馏水于小玻杯中,以防漏气。此时蒸气吹入反应室,氨气通过冷凝管而流入三角瓶 中的硼酸溶液中,蒸馏3分钟,移开三角瓶蒸馏装置下的冷凝管空蒸1分钟,用少量蒸馏水 冲冷凝管外壁,再将三角瓶移开蒸馏装置,准备滴定
饲料分析及饲料质量检测技术 （3）待烧瓶冷却后加蒸馏水约 20ml 摇匀，然后将烧瓶中溶液无损地转移到 100ml 洗净 的溶量瓶中，用蒸馏水冲洗凯氏烧瓶 5-6 次（约 10ml/次），洗液亦注入容量瓶内，冷却后， 再用蒸馏水稀释至容量瓶刻度，混匀后供测定氮用。 （4）同时作空白，不加样品，只加纸，其它与样品同样操作。 2、蒸馏：（1）煮沸蒸气发生瓶中蒸馏水，并使蒸气洗涤蒸馏器。（2）用量筒量取 10 毫 升 2%的硼酸溶液加入 150 毫升或 250 毫升三角瓶内，再加入甲红——溴甲酚绿混合指示剂 2 滴，置于蒸馏装置的冷凝管下，使管口浸入硼酸（H3BO4）溶液内。 （3）用 10 毫升移液管量取 10ml 样本消化液，从蒸馏装置上的小玻杯中注入反应室，再 用少量蒸馏水冲洗小玻杯（注意如注入蒸馏水过多则反应室温度较低，将使反应室内的液体 溢出，使蒸馏结果偏低），将小玻杯上的棒状玻璃塞塞紧，使之不漏气。 （4）用量筒量取 5ml-10ml 饱和氢氧化钠溶液注入小玻杯中，小心地轻轻提起棒状玻塞， 使氢氧化钠流入反应室内，（注意不能将棒状玻塞完全提起，以免氨气跑掉），立刻将玻塞盖 紧，加蒸馏水于小玻杯中，以防漏气。此时蒸气吹入反应室，氨气通过冷凝管而流入三角瓶 中的硼酸溶液中，蒸馏 3 分钟，移开三角瓶蒸馏装置下的冷凝管空蒸 1 分钟，用少量蒸馏水 冲冷凝管外壁，再将三角瓶移开蒸馏装置，准备滴定。 15