2、具有生物活性DNA的制备 动物内脏(肝、脾、胸腺)加4倍重量生理盐水 经组织捣碎机捣碎1分钟,匀浆于2500/pm离心30分 钟,沉淀用同样体积的生理盐水洗涤3次,每次洗后 离心,将沉淀悬浮于20倍重量的冷生理盐水中,再捣 碎3分钟,加入2倍量5%的(用45%乙醇作溶剂)十 二烷基磺酸钠,并搅拌2~3小时,在0℃250/pm离 心,在上层液中加入等体积的冷95%乙醇,离心即可 得到纤维状DNA,再用冷乙醇和丙酮洗涤,减压低温 干燥得粗品DNA。粗品DNA溶于适量蒸馏水,加入5 6十二烷基磺酸钠达1/10体积,搅拌1小时,经 5000r/pm离心1小时,清液中加入NaC达1mol/L, 再缓慢加入冷95%乙醇,DNA析出,经乙醇、丙酮洗 涤,真空干燥得具有生物活性的DNA(活性DNA制 备需在0~3℃操作)
2、具有生物活性DNA的制备 动物内脏（肝、脾、胸腺）加4倍重量生理盐水 经组织捣碎机捣碎1分钟，匀浆于2500r／pm离心30分 钟，沉淀用同样体积的生理盐水洗涤3次，每次洗后 离心，将沉淀悬浮于20倍重量的冷生理盐水中，再捣 碎3分钟，加入2倍量5％的（用45%乙醇作溶剂）十 二烷基磺酸钠，并搅拌2～3小时，在0℃2500r／pm离 心，在上层液中加入等体积的冷95％乙醇，离心即可 得到纤维状DNA，再用冷乙醇和丙酮洗涤，减压低温 干燥得粗品DNA。粗品DNA溶于适量蒸馏水，加入5 ％十二烷基磺酸钠达1／10体积，搅拌1小时，经 5000r／pm离心1小时，清液中加入NaCl达1mol／L， 再缓慢加入冷95%乙醇，DNA析出，经乙醇、丙酮洗 涤，真空干燥得具有生物活性的DNA（活性DNA制 备需在0～3℃操作）
用酶解法、发酵法和半合成法制备核苷酸 (一)酶解法及碱水解法制备核苷酸 1、酶解法制备脱氧核苷酸 桔青霉产生5-磷酸二脂酶 红酵母产生3-磷酸二脂酶
二、用酶解法、发酵法和半合成法制备核苷酸 （一）酶解法及碱水解法制备核苷酸 1、酶解法制备脱氧核苷酸 桔青霉产生5`-磷酸二脂酶 红酵母产生3`-磷酸二脂酶
桔青霉或熄曲霉 鱼精 液体培养跌 绞肉机粉碎 发酵液 鱼精匀浆 压滤除菌体 热变性 冷却,过滤 混和,调pH 酶液 DNA溶液 保温 ){.::s 酶解液 加热使酶失活,调pH9.0 量冷处过夜;过滤 DNA降解液 吸附于氯型阴离子交换树 脂分步洗脱 脱氧胞苷酸 脱氧腺苷酸 脱氧胸苷酸 脱氧鸟苷酸 :,:(MP '(dAMP),' (dIMP) (MP)
2、酶解法制备戊糖核苷酸 我国从60年代开始使用核酸酶P降解核糖核酸生产 单核苷酸,日本年产呈味核苷酸(肌苷酸和鸟苷酸) 3000吨,其中60%是使用酶解法生产的。 酶解法生产5“—单核苷酸工艺流程
2、酶解法制备戊糖核苷酸 我国从60年代开始使用核酸酶P1降解核糖核酸生产 单核苷酸，日本年产呈味核苷酸（肌苷酸和鸟苷酸） 3000吨，其中60%是使用酶解法生产的。 酶解法生产5‘—单核苷酸工艺流程
桔育霉M843培养 酵母提取 产生核酸薛P RNA RNA降解成 5—单核苷酸 元寓水厘舱 阳高子 魔出液pH,5 pH2.0~3.5 pH3.5~4.0 H3.5~4.5 UMP混浊液 GMP. CMP CMP AMP 混合液 稀溶液 稀溶液 碳柱吸附, 阴离子树脂 解吸 分离 CMP 减压 除盐等杂质 pH4流出液 溶液 阴高子树 浓缩 UMP 3%NaC1洗脱 脂浓缩 阴高子树脂分离「GMP GMP AMP 纯化 浓溶液 浓溶液 浓液 UMP 稀溶液 酒精沉淀, 酒特沉 酒精抗 浓缩 干燥 淀,干燥 淀于燥 酒精沉淀 UMP GMP MP 干粉 干粉 干粉 干粉