锦医科大学Jinzhou Medical Universtty实验结果实验目的实验原理实验材料实验步骤基因组提取试剂盒实验小鼠16
16 Jinzhou Medical University 实验目的 实验原理 实验材料 实验步骤 实验结果 实验小鼠 基因组提取试剂盒
锦州医科大学Jinzhou Medical Untversty实验目的实验材料实验步骤1实验结果实验原理1.裂解组织细胞，变性蛋白，沉淀生物大分子组织块尽量剪碎，处死小鼠，取肝脏20-50mg，剪碎否则影响裂解及消化研磨，加入1.5mL离心管内+加入600uLLysisBufferA主要含有(L-A），振荡混匀SDS（溶解膜性结构并使蛋白质变性，使核酸与蛋白分离EDTA（整合二价阳离子以抑制DNaSe）（缓冲体）和Tris-HCI加入10μL蛋白酶K(K)60C水浴40min，消化降解蛋白质其间颠倒混匀数次17
17 Jinzhou Medical University 实验目的 实验原理 实验材料 实验步骤1 实验结果 处死小鼠，取肝脏20-50mg，剪碎， 研磨，加入1.5mL离心管内 加入600 μL Lysis Buffer A （L-A），振荡混匀 加入10 μL 蛋白酶 K （K）， 60 ℃水浴40min， 其间颠倒混匀数次 组织块尽量剪碎， 否则影响裂解及消化 主要含有 SDS（溶解膜性结构并使蛋白质变性， 使核酸与蛋白分离） EDTA（螯合二价阳离子以抑制DNase） 和Tris-HCl （缓冲体） 消化降解蛋白质 1. 裂解组织细胞，变性蛋白，沉淀生物大分子
锦州医科大学Jinzhou Medlcal Untversty实验目的实验原理实验材料实验步骤1实验结果核酸内切酶加入10μLRNaseA，混匀，去除DNA制品中的RNA室温放置10min况淀作用，内含有醋酸，加入400μLLysisBufferB提供低pH环境剧烈震荡30S一上清可能出现少量白色漂浮物，12.000rpm离心5min，将此为未消化完全的细胞和蛋白质上清转入离心柱中，静置2min18
18 Jinzhou Medical University 12,000rpm,离心5 min，将 上清转入离心柱中，静置2 min 加入10 μL RNase A，混匀， 室温放置10 min 加入400 μL Lysis Buffer B， 剧烈震荡30 s 核酸内切酶、 去除DNA制品中的RNA 沉淀作用，内含有醋酸， 提供低pH环境 上清可能出现少量白色漂浮物， 此为未消化完全的细胞和蛋白质 实验目的 实验原理 实验材料 实验步骤1 实验结果
锦州医科大学Jinzhou Medical Universtty实验目的实验原理实验材料实验步骤2实验结果2.DNA吸附在硅基质膜上，清洗去除盐等杂质12.000rpm离心1min，弃废液工Wash buffer A加入70oμLWashbufferA（含60%的乙醇）12,000rpm离心1min，弃废液Wash bufferB（含80%的乙醇）加入7oouLWashbufferB12.000rpm离心1min，弃废液主要去除盐等杂J质加入500μLWashbufferB12,000rpm离心1min，弃废液+再次12000rpm离心2min，将离心柱置于新的离心管中，并打开离心柱盖，于室温1-2min，直至无明显乙醇味19
19 Jinzhou Medical University 实验目的 实验原理 实验材料 实验步骤2 实验结果 2. DNA吸附在硅基质膜上，清洗去除盐等杂质 12,000 rpm离心1 min，弃废液 加入700 μL Wash buffer A， 12,000 rpm离心 1min，弃废液 加入700 μL Wash buffer B， 12,000 rpm离心1min，弃废液 加入500 μL Wash buffer B， 12,000 rpm离心1 min，弃废液 再次12,000 rpm离心2 min，将离心柱置于新的离心管中，并打开离 心柱盖，于室温1-2min，直至无明显乙醇味 Wash buffer A （含60%的乙醇） Wash buffer B （含80%的乙醇） 主要去除盐等杂 质
锦州医科大学Jinzhou Medlcal Untversty实验目的实验原理实验材料实验步骤3实验结果3.洗脱DNA在硅基质膜中央加入50μLElutionBuffer（EB）(事先预热55~65C)置于室温2min一12,000rpm离心2min—所得液体即为基因组DNA溶液。（EB）：主要是TEbuffer提ElutionBuffer供高pH值环境，使吸附的DNA被洗脱下来。20
20 Jinzhou Medical University 实验目的 实验原理 实验材料 实验步骤3 实验结果 3. 洗脱DNA 在硅基质膜中央加入50 μL Elution Buffer（EB）(事先预 热55～65 ℃)→置于室温2 min→12,000 rpm离心2 min→ 所得液体即为基因组DNA溶液。 • Elution Buffer（EB）：主要是TE buffer, 提 供高pH值环境，使吸附的DNA被洗脱下来