因锅内压力突然下降，使容器内的培养基或试剂由于内外压力不平衡而冲出容器口，造成瓶口被污染，甚至灼伤操作者。8、无菌检查：将已灭菌的培养基放入37℃恒温培养箱培养24h，无杂菌生长后即可使用
因锅内压力突然下降，使容器内的培养基或试剂由于内外压力不平衡而冲出容 器口，造成瓶口被污染，甚至灼伤操作者。 8、无菌检查：将已灭菌的培养基放入 37℃恒温培养箱培养 24h，无杂菌生长后 即可使用
实验三病原微生物的分离、纯化和培养病原物的分离培养是把所需要的病原物从植物病组织中单独地分离出来，并在相应的人工培养基上培养，同时给以适当的环境条件，使它们能繁殖而成为纯培养。目的是为了确定发现的病原物的致病性，研究其生物学特性和病害的防治方法。因此病原物的分离培养是林病工作者必须熟练掌握的基本技术。一、目的植物病原菌的分离培养是植物病理学实验最基本的操作技术之一，它对原害鉴定，病原形态观察、植物病害接种体的培养等方面都是经常使用的研究手段。通过本实验，要求植物病原菌分离培养的一般原则和方法。二、原理植物患病组织内的真菌菌丝体，如果给予适宜的环境条件，除个别种类外，一般都能恢复生长和繁殖。植物病原菌的分离就是指通过人工培养，从染病植物组织中将病原真菌与其它杂菌相分开，并从寄主植物中分离出来，再将分离到的病原菌于适宜环境内纯化，这个过程总称植物病菌的分离培养。植物病原真菌的分离一般都是采用组织分离法，就是切取小块病组织，经表面消毒和灭菌水洗过后，移到人工培养基上培养。三、实验材料及准备：l：分离材料：梨黑斑病（Alternariakikuchiana），柿树圆斑病（Pestnlotiasp）及杉木炭疽病（Glomerellacingolata）新发病的病叶；杨树烂皮病（Cytosporachrysosperma）国槐腐烂病（Dothiorellasp.）的带有新病斑的枝条；油松种子。2.分离用具（每小组为单位）酒精灯4个，手术剪4把，眼科镊4把，PDA培养基3瓶，培养皿（Φ9cm）24套，小烧杯（5ml）4个，大烧杯1个，斜面培养基12管，灭菌水
实验三 病原微生物的分离、纯化和培养 病原物的分离培养是把所需要的病原物从植物病组织中单独地分离出来， 并在相应的人工培养基上培养，同时给以适当的环境条件，使它们能繁殖而成 为纯培养。目的是为了确定发现的病原物的致病性，研究其生物学特性和病害 的防治方法。因此病原物的分离培养是林病工作者必须熟练掌握的基本技术。 一、目的 植物病原菌的分离培养是植物病理学实验最基本的操作技术之一，它对原 害鉴定，病原形态观察、植物病害接种体的培养等方面都是经常使用的研究手 段。通过本实验，要求植物病原菌分离培养的一般原则和方法。 二、原理 植物患病组织内的真菌菌丝体，如果给予适宜的环境条件，除个别种类外， 一般都能恢复生长和繁殖。植物病原菌的分离就是指通过人工培养，从染病植 物组织中将病原真菌与其它杂菌相分开，并从寄主植物中分离出来，再将分离 到的病原菌于适宜环境内纯化，这个过程总称植物病菌的分离培养。植物病原 真菌的分离一般都是采用组织分离法，就是切取小块病组织，经表面消毒和灭 菌水洗过后，移到人工培养基上培养。 三、实验材料及准备： 1．分离材料：梨黑斑病（Alternaria kikuchiana），柿树圆斑病（Pestnlotia sp）及杉木炭疽病（Glomerella cingolata）新发病的病叶；杨树烂皮病 （Cytospora chrysosperma）国槐腐烂病（Dothiorella sp.）的带有新病斑的枝条； 油松种子。 2．分离用具（每小组为单位） 酒精灯 4 个，手术剪 4 把，眼科镊 4 把，PDA 培养基 3 瓶，培养皿 （Φ9cm）24 套，小烧杯（5ml）4 个，大烧杯 1 个，斜面培养基 12 管，灭菌水
4瓶，75%酒精瓶1个（内放脱脂棉球）0.1%升汞瓶1个，5%乳酸瓶（60ml）1个，火柴1盒，湿、干纱布各4张。四、实验方法及步骤：（一）、分离前的准备工作：1.工作环境的清洁和消毒分离培养一般在无菌室、无菌箱或无菌工作台（超净工作台）上进行，无菌室和无菌箱要经过喷雾除尘，并用药物或紫外线照射消毒（常用消毒药物为70%酒精，2%煤酚皂液，5%石炭酸液等喷雾。若用紫外线灯照射则需20-30分钟）。在没有上述设备条件时，在清洁房间里关闭门窗，避免空气流动，经过喷雾除去空气及地面灰尘后进行操作，也可获得较好的结果。工作前擦净桌面，最好铺上湿纱布。将所需用的物品按次序放在工作台上，避免工作时走动，工作人员最好穿上灭菌后的工作服，带上口罩，并用肥皂洗手，用70%酒精或0.1%新洁尔灭擦手。2.分离用具的消毒凡是和分离材料接触的器血（刀、剪、镊、针等）都要随时（至少在使用时）保持无菌，将这些用具浸于70%酒精中，使用时在灯焰上灭菌烧去酒精，如此2-3次（刀、剪、镊等不宜在灯焰上烧时过长，以防退火）。再次使用时必须重复灭菌。培养血、试验等要经过干热灭菌。培养基及洗涤或稀释用蒸馏水都需要事先经过高压蒸气灭菌。3.分离材料的选择用新发病的植株、器官或组织做为分离材料，可以减少腐生菌的污染。任何植物坏死部分的内部或表面，都可能有腐生微生物的孽生，所以一般斑点病害应从邻近健全组织，即从病、健组织交界处获得分离材料。（二）、植物病原菌的分离1叶斑类和枝杆病斑类（非维管束侵染）病原菌分离：
4 瓶，75%酒精瓶 1 个（内放脱脂棉球）0.1%升汞瓶 1 个，5%乳酸瓶（60ml）1 个，火柴 1 盒，湿、干纱布各 4 张。 四、实验方法及步骤： （一）、分离前的准备工作： 1．工作环境的清洁和消毒 分离培养一般在无菌室、无菌箱或无菌工作台（超净工作台）上进行，无 菌室和无菌箱要经过喷雾除尘，并用药物或紫外线照射消毒（常用消毒药物为 70%酒精，2%煤酚皂液，5%石炭酸液等喷雾。若用紫外线灯照射则需 20-30 分 钟）。在没有上述设备条件时，在清洁房间里关闭门窗，避免空气流动，经过喷 雾除去空气及地面灰尘后进行操作，也可获得较好的结果。工作前擦净桌面， 最好铺上湿纱布。将所需用的物品按次序放在工作台上，避免工作时走动，工 作人员最好穿上灭菌后的工作服，带上口罩，并用肥皂洗手，用 70%酒精或 0.1%新洁尔灭擦手。 2．分离用具的消毒 凡是和分离材料接触的器皿（刀、剪、镊、针等）都要随时（至少在使用 时）保持无菌，将这些用具浸于 70%酒精中，使用时在灯焰上灭菌烧去酒精， 如此 2-3 次（刀、剪、镊等不宜在灯焰上烧时过长，以防退火）。再次使用时必 须重复灭菌。培养皿、试验等要经过干热灭菌。培养基及洗涤或稀释用蒸馏水 都需要事先经过高压蒸气灭菌。 3．分离材料的选择 用新发病的植株、器官或组织做为分离材料，可以减少腐生菌的污染。任 何植物坏死部分的内部或表面，都可能有腐生微生物的孽生，所以一般斑点病 害应从邻近健全组织，即从病、健组织交界处获得分离材料。 （二）、植物病原菌的分离 1．叶斑类和枝杆病斑类（非维管束侵染）病原菌分离：