免疫学及免疫学检验 ()透射比浊法 1.原理抗原抗体在一定缓冲液中形成免疫复合 物(C),当光线透过反应溶液时,由于溶液内 复合物粒子对光线的反射和吸收,引起透射 光减少,免疫复合物量越多,透射光越少 即光线吸收越多,可用吸光度表示。吸光度 和复合物的量成正比,当抗体量固定时,与 待检抗原量成正比。用抗原标准品建立标准 曲线,可测出待检抗原含量
免疫学及免疫学检验 (一) 透射比浊法 1. 原理 抗原抗体在一定缓冲液中形成免疫复合 物(IC)，当光线透过反应溶液时，由于溶液内 复合物粒子对光线的反射和吸收，引起透射 光减少，免疫复合物量越多，透射光越少， 即光线吸收越多，可用吸光度表示。吸光度 和复合物的量成正比，当抗体量固定时，与 待检抗原量成正比。用抗原标准品建立标准 曲线，可测出待检抗原含量
免疫学及免疫学检验 2.操作步骤 (1)用稀释缓冲液将待检样品和标准品按规定稀 释,取一定量加至测定管中。 (2)加最适工作浓度(用方阵法预先滴定)的抗体, 孵育一定时间,测定吸光度(A)值。 (3)以不同浓度抗原含量为横轴,吸光度为纵轴 绘标准曲线。从标准曲线可得待检抗原量
免疫学及免疫学检验 2. 操作步骤 (1) 用稀释缓冲液将待检样品和标准品按规定稀 释，取一定量加至测定管中。 (2) 加最适工作浓度(用方阵法预先滴定)的抗体， 孵育一定时间，测定吸光度(A)值。 (3) 以不同浓度抗原含量为横轴，吸光度为纵轴， 绘标准曲线。从标准曲线可得待检抗原量
免疫学及免疫学检验 3.方法评价 敏感度高于单相琼脂扩散试验5~10 倍,批内、批间重复性较好,变异系数 <10%,操作简便快速,1h可报告结果
免疫学及免疫学检验 3. 方法评价 敏感度高于单相琼脂扩散试验5~10 倍，批内、批间重复性较好，变异系数 <10%，操作简便快速，1h可报告结果
免疫学及免疫学检验 (二)散射比浊法 散射光系指一定波长的光沿水平轴照射,碰 到小颗粒的免疫复合物,光线被折射,发生偏 转,这种偏转的角度可因光线波长和颗粒大小 不同而有所区别。散射浊度法是在入射光的 定角度检测粒子发出的散射光,散射光的强度 与复合物的含量呈正比,即待测抗原越多,形 成复合物越多,散射光强度越强。又可分为速 率散射比浊法( (rate nephelome-try)和终点散射比 浊法 endpoint nephelometry)
免疫学及免疫学检验 (二) 散射比浊法 散射光系指一定波长的光沿水平轴照射，碰 到小颗粒的免疫复合物，光线被折射，发生偏 转，这种偏转的角度可因光线波长和颗粒大小 不同而有所区别。散射浊度法是在入射光的一 定角度检测粒子发出的散射光，散射光的强度 与复合物的含量呈正比，即待测抗原越多，形 成复合物越多，散射光强度越强。又可分为速 率散射比浊法(rate nephelome-try)和终点散射比 浊法(endpoint nephelometry)
免疫学及免疫学检验 1.速率散射比浊法 (1)原理:是一种抗原抗体结合动态测定法。所 谓速率是抗原抗体结合反应过程中,在单位 时间内两者结合的速度。速率法是测定最大 反应速率,即在抗原抗体反应达最髙峰时, 通常为数十秒钟,测定其复合物形成的量 峰值的高低在抗体过量情况下与抗原的量成 正比。峰值出现的时间与抗体的浓度及其亲 和力直接相关。不同抗原含量其速率峰值不 同,通过微电脑处理,求出抗原含量
免疫学及免疫学检验 1. 速率散射比浊法 (1) 原理：是一种抗原抗体结合动态测定法。所 谓速率是抗原抗体结合反应过程中，在单位 时间内两者结合的速度。速率法是测定最大 反应速率，即在抗原抗体反应达最高峰时， 通常为数十秒钟，测定其复合物形成的量。 峰值的高低在抗体过量情况下与抗原的量成 正比。峰值出现的时间与抗体的浓度及其亲 和力直接相关。不同抗原含量其速率峰值不 同，通过微电脑处理，求出抗原含量