摇匀，置沸水浴中2~3分钟，观察两管颜色变化。 2.嘌呤碱的鉴定：试管1支，加入饱和苦味酸约2l,再加入核酸水解液46滴，摇匀，静 止室温中，观察有无针状结晶出现。 3.核糖的鉴定：试管2支、标号，按表6操作： 表6 试剂（滴） 测定管 对照管 核酸水解液 6 5%硫酸 6 Bial试剂 9 9 摇匀，置沸水浴中5分钟后观察两管颜色变化 4.脱氧核糖的鉴定：试管2支、标号，按表7操作： 老7 试剂（滴） 测定管对照管 核酸水解液 20 5%硫酸 20 二苯胺试剂 40 摇匀，置沸水浴中15分钟后观察两管颜色变化。 [结果 记录上述各管实验结果，并加以解释。 [注意事项] 1.用新鲜肝组织（可取自小鼠、兔和猪等）制备肝匀浆时，必须充分研磨肝组织。 2.苯酚有腐蚀性，切勿与皮肤接触，注意安全。 3.该实验为定性实验，需记录实验结果并加以解释。 4.正确使用离心机（掌握离心过程中离心管的对称和平衡）。 5.为充分利用时间，可先做脱氧核糖鉴定的实验，若延长沸水浴中的反应时间，其结果更 明显
6 摇匀，置沸水浴中 2~3 分钟，观察两管颜色变化。 2．嘌呤碱的鉴定：试管 1 支，加入饱和苦味酸约 2ml，再加入核酸水解液 4~6 滴，摇匀，静 止室温中，观察有无针状结晶出现。 3．核糖的鉴定：试管 2 支、标号，按表 6 操作： 表 6 试 剂（滴） 测定管 对照管 核酸水解液 6 — 5%硫酸 — 6 Bial 试剂 9 9 摇匀，置沸水浴中 5 分钟后观察两管颜色变化。 4．脱氧核糖的鉴定：试管 2 支、标号，按表 7 操作： 表 7 试 剂（滴） 测定管 对照管 核酸水解液 20 — 5%硫酸 — 20 二苯胺试剂 40 40 摇匀，置沸水浴中 15 分钟后观察两管颜色变化。 [结果] 记录上述各管实验结果，并加以解释。 [注意事项] 1．用新鲜肝组织（可取自小鼠、兔和猪等）制备肝匀浆时，必须充分研磨肝组织。 2．苯酚有腐蚀性，切勿与皮肤接触，注意安全。 3．该实验为定性实验，需记录实验结果并加以解释。 4．正确使用离心机（掌握离心过程中离心管的对称和平衡）。 5．为充分利用时间，可先做脱氧核糖鉴定的实验，若延长沸水浴中的反应时间，其结果更 明显
实验3邻甲苯胺法测定血清（浆）葡萄糖 [原理]在热的醋酸溶液中，葡萄糖醛基与邻甲苯胺缩合、脱水，生成希夫氏碱(Sch近 bas©)，经分子重排生成蓝绿色化合物，其颜色深浅在一定范围内与血糖浓度成正比。 CHOH-CHOH ●H CHOH CHOH-CHO 酸，△ -CHO HO-CH2 3H2O OH-CH2 葡萄糖 甲基糠醛 CH HC -CH OH-CH2 O OH-CH2 O 羟甲基糠醛 邻甲苯胺 醛亚胺（蓝绿色） [试剂] 1.邻甲苯胺试剂称取硫脲(AR)2.5g,溶于冰醋酸(AR)750ml中。将此液转入1L容量瓶内， 加邻甲苯胺150ml,2.4%硼酸溶液100ml,用冰醋酸定容至刻度。此溶液应置棕色瓶内室温保存， 至少可应用2个月。新配制试剂应放置24h后待“老化”使用，否则反应产物的吸光度低。 2.100mmol/L葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g,溶于12mmol/L苯 甲酸溶液约70ml中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h以后方可使用。 3.5.0mmol/L葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml放于100ml容量瓶中，用 12 nmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 4.0.3molL三氯醋酸溶液称取三氯醋酸5g,溶于蒸馏水70ml中，然后用蒸馏水定容至 100ml,混匀即可。 [主要器材] 1,试管及试管架 2.刻度吸量管
7 实验 3 邻甲苯胺法测定血清（浆）葡萄糖 [原理] 在热的醋酸溶液中，葡萄糖醛基与邻甲苯胺缩合、脱水，生成希夫氏碱（Schiff base），经分子重排生成蓝绿色化合物，其颜色深浅在一定范围内与血糖浓度成正比。 [试剂] 1．邻甲苯胺试剂 称取硫脲(AR)2.5g，溶于冰醋酸(AR)750ml 中。将此液转入 1 L 容量瓶内， 加邻甲苯胺 150ml，2.4%硼酸溶液 100ml，用冰醋酸定容至刻度。此溶液应置棕色瓶内室温保存， 至少可应用 2 个月。新配制试剂应放置 24h 后待“老化”使用，否则反应产物的吸光度低。 2．100mmol/L 葡萄糖标准贮存液 称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g，溶于 12mmol/L 苯 甲酸溶液约 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml。2h 以后方可使用。 3．5.0mmol/L 葡萄糖标准应用液 吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 4．0.3mol/L 三氯醋酸溶液 称取三氯醋酸 5g，溶于蒸馏水 70ml 中，然后用蒸馏水定容至 100ml，混匀即可。 [主要器材] 1．试管及试管架 2．刻度吸量管 CHOH—CHOH CHOH CHOH—CHO HO—CH2 葡萄糖 羟甲基糠醛 HC CH O C C—CHO OH—CH2 酸， 3H2O 羟甲基糠醛 邻甲苯胺 醛亚胺（蓝绿色） HC CH O C C—CHO OH—CH2 CH3 HC CH O C C—CH= OH—CH2 N— CH3 + H2N—
3.721型分光光度计 [操作步骤] 1.血清、血浆、脑脊液及清亮的胸腹水按表8操作。 表8 加入物(ml) 空白管 标准管测定管 蒸馏水 0.1 葡萄糖标准应用液(5.0mmol/L) 0.1 血清（血浆、脑脊液） 0.1 邻甲苯胺试剂 3.0 3.0 30 混匀，置沸水中煮沸12min,取出置冷水中冷却3min,在630nm处比色，以空白管调零 读取各管吸光度。 2.严重黄疸、溶血及乳糜样血清制备无蛋白血滤液：取血清0.2ml,加入0.3molL三氯醋 酸溶液l.8ml,混匀，静置5min,离心5min,取上清液按表9操作。 表9 加入物(ml)） 空白管标准管测定管 三氯醋酸溶液 1.0 0.9 葡萄糖标准应用液(5.0mmo1/L) 0.1 无蛋白血滤液 1.0 邻甲苯胺试剂 5.0 5.0 5.0 混匀，置沸水浴中煮沸12min,取出置自米水中冷却3min,在波长630nm处比色，以空白 管调零，读取各管吸光度。 [结果计算] 血糖浓度(mmol/L):测定管光密度 ×5.0 标准管光密度 1参考范围13.89~6.11 nmol/L [注意事项] 1.邻甲苯胺为浅黄色油状液体，易氧化。配制前宜重蒸馏，收集199~201℃的馏出部分 此部分馏出液应为无色或浅黄色，然后加入盐酸精胺(1gL)防止氧化，置棕色瓶密封避光保存
8 3．721 型分光光度计 [操作步骤] 1． 血清、血浆、脑脊液及清亮的胸腹水按表 8 操作。 表 8 加入物(ml) 空白管 标准管 测定管 蒸馏水 0.1 － － 葡萄糖标准应用液（5.0 mmol/L） － 0.1 － 血清(血浆、脑脊液) － － 0.1 邻甲苯胺试剂 3.0 3.0 3.0 混匀，置沸水中煮沸 12min，取出置冷水中冷却 3min，在 630nm 处比色，以空白管调零， 读取各管吸光度。 2． 严重黄疸、溶血及乳糜样血清制备无蛋白血滤液：取血清 0.2ml，加入 0.3mol/L 三氯醋 酸溶液 l.8ml，混匀，静置 5min，离心 5min，取上清液按表 9 操作。 表 9 加入物(ml) 空白管 标准管 测定管 三氯醋酸溶液 1.0 0.9 － 葡萄糖标准应用液（5.0 mmol/L） － 0.1 － 无蛋白血滤液 － － 1.0 邻甲苯胺试剂 5.0 5.0 5.0 混匀，置沸水浴中煮沸 12min，取出置自来水中冷却 3min，在波长 630nm 处比色，以空白 管调零，读取各管吸光度。 [结果计算] 血糖浓度（mmol/L）= ×5.0 [参考范围] 3.89 ～6.11mmol/L [注意事项] 1．邻甲苯胺为浅黄色油状液体，易氧化。配制前宜重蒸馏，收集 199～201℃的馏出部分， 此部分馏出液应为无色或浅黄色，然后加入盐酸精胺(1g/L)防止氧化，置棕色瓶密封避光保存。 测定管光密度 标准管光密度
2.邻甲苯胺在冰醋酸中并不十分稳定，易氧化产生棕色物质而干扰比色，故在邻甲苯胺试 剂中加入硫脲，使试剂有抗氧化作用，减少棕色干扰，增加试剂的稳定性，降低空白管的吸光度， 并有一定的增色效应 3.硼酸与ā一葡萄糖的羟基结合，能促进葡萄糖转变醛式构型，增加反应的活性。 4.沸水浴时沸水一定要盖过管内的液面，否则温度不均匀，影响显色。 5.此法受煮沸时间、比色时间、试剂存放时间等因素的影响。一般不宜以校正曲线法进行 计算，故每次应同时作标准管。 6.最终反应液偶尔会产生混浊，最常见原因是高脂血症：此时，可向显色液3ml中加入异 丙醇1.5ml,充分混匀：溶解脂质可消除混浊，所测吸光度乘以1.5。注射右旋糖酐时，由于右 旋糖酐不溶于邻甲苯胺试剂而产生混浊：冷水浴太冷时亦会出现混浊。 实验4酪氨酸酶的催化作用 原理」 酪氨酸酶是一种以铜为辅基的结合蛋白酶，这种氧化酶可直接作用于底物多巴生成多巴醌， 然后经过一系列的反应，最终生成黑色素。在多巴转变为多巴醌的反应中，酪氨酸酶使多巴中的 氢原子的两个电子传递给分子氧，使后者转变为氧离子，游离在溶液中的两个质子与氧离子化合 生成水。其催化的主要反应及电子传递过程如下： CH:CHCOOH CH2CHCOOH ,NH酪氨酸羟化酶 NH2 酪氨酸码 NH2 [O](黑色素细胞) OH (2e OH 0 OH 2Cu 2C 酪氨酸 多巴 2H 多巴醒 1/20 黑色素 H2O
9 2．邻甲苯胺在冰醋酸中并不十分稳定，易氧化产生棕色物质而干扰比色，故在邻甲苯胺试 剂中加入硫脲，使试剂有抗氧化作用，减少棕色干扰，增加试剂的稳定性，降低空白管的吸光度， 并有一定的增色效应。 3．硼酸与α-葡萄糖的羟基结合，能促进葡萄糖转变醛式构型，增加反应的活性。 4．沸水浴时沸水一定要盖过管内的液面，否则温度不均匀，影响显色。 5．此法受煮沸时间、比色时间、试剂存放时间等因素的影响。一般不宜以校正曲线法进行 计算，故每次应同时作标准管。 6．最终反应液偶尔会产生混浊，最常见原因是高脂血症；此时，可向显色液 3ml 中加入异 丙醇 1.5ml，充分混匀；溶解脂质可消除混浊，所测吸光度乘以 1.5 。注射右旋糖酐时，由于右 旋糖酐不溶于邻甲苯胺试剂而产生混浊；冷水浴太冷时亦会出现混浊。 实验 4 酪氨酸酶的催化作用 [原理] 酪氨酸酶是一种以铜为辅基的结合蛋白酶，这种氧化酶可直接作用于底物多巴生成多巴醌， 然后经过一系列的反应，最终生成黑色素。在多巴转变为多巴醌的反应中，酪氨酸酶使多巴中的 氢原子的两个电子传递给分子氧，使后者转变为氧离子，游离在溶液中的两个质子与氧离子化合 生成水。其催化的主要反应及电子传递过程如下： 酪氨酸羟化酶 [O]（黑色素细胞） OH CH2CHCOOH NH2 O CH2CHCOOH NH2 酪氨酸 OH CH2CHCOOH NH2 OH 酪氨酸酶 2H+ 2e 2H O 1/2O2 2- H2O 多巴 多巴醌 聚 合 黑色素 2Cu2+ 2Cu+ O
酪氨酸是甲状腺素、肾上腺素和黑色素的前体。人类皮肤、毛发和眼睛虹膜的黑色素是酪氨 酸在酪氨酸羟化酶催化作用下生成了3,4二羟苯丙氨酸（简称多巴，DOPA),后者在酪氨酸酶的 作用下生成多巴醌，而后经过一系列中间反应，最后聚合成黑色素。白化病(albunism)是一种 表现为皮肤、毛发和虹膜变白，因为缺乏酪氨酸酶而不能合成黑色素的先天性代谢缺陷性疾病。 酪氨酸酶也广泛分布于植物界，例如新鲜蘑菇、马铃薯（外层含量尤多）和谷物等。 试剂 1.酪氨酸溶液0.1g酪氨酸溶于100ml0.1%碳酸钠溶液中。 2.马铃薯抽提液切碎马铃薯约6g置于研体中，加少量净砂，研成匀浆，再加蒸馏水10ml 充分研磨；最后通过棉花过滤，即可获得含有酪氨酸酶的马铃薯抽提液。 3.煮沸过的马铃薯滤液取2ml试剂2于试管内，在酒精灯上加热至沸以破坏酶的活性。 4.液体石蜡 【主要器材 研体、恒温水浴箱 [操作步骤 取试管3支按表10进行操作 表10 试剂（滴） 3 者沸过的马铃薯液 20 马铃薯抽提液 20 20 酪氨酸液 20 20 20 充分混匀各管 液体石蜡 5 置35℃~40℃水浴约30分钟，观察并记录各管颜色，试解释所得的结果。 注意事项 1.煮沸马铃薯液时，小心勿使液体溅出。 2,加液体石蜡时宜斜执试管，沿管壁缓缓加入，不要产生气泡：加入的液体石蜡必需完全 覆盖液面，以隔绝空气
10 酪氨酸是甲状腺素、肾上腺素和黑色素的前体。人类皮肤、毛发和眼睛虹膜的黑色素是酪氨 酸在酪氨酸羟化酶催化作用下生成了 3,4-二羟苯丙氨酸（简称多巴，DOPA），后者在酪氨酸酶的 作用下生成多巴醌，而后经过一系列中间反应，最后聚合成黑色素。白化病（albunism）是一种 表现为皮肤、毛发和虹膜变白，因为缺乏酪氨酸酶而不能合成黑色素的先天性代谢缺陷性疾病。 酪氨酸酶也广泛分布于植物界，例如新鲜蘑菇、马铃薯（外层含量尤多）和谷物等。 [试剂] 1．酪氨酸溶液 0.1g 酪氨酸溶于 100ml 0.1%碳酸钠溶液中。 2．马铃薯抽提液 切碎马铃薯约 6g 置于研钵中，加少量净砂，研成匀浆，再加蒸馏水 l0ml 充分研磨；最后通过棉花过滤，即可获得含有酪氨酸酶的马铃薯抽提液。 3．煮沸过的马铃薯滤液 取 2ml 试剂 2 于试管内，在酒精灯上加热至沸以破坏酶的活性。 4．液体石蜡 [主要器材] 研钵、恒温水浴箱 [操作步骤] 取试管 3 支按表 10 进行操作 表 10 试剂（滴） 1 2 3 煮沸过的马铃薯液 20 — — 马铃薯抽提液 — 20 20 酪氨酸液 20 20 20 充分混匀各管 液体石蜡 — — 5 置 35℃~40℃水浴约 30 分钟，观察并记录各管颜色，试解释所得的结果。 [注意事项] 1．煮沸马铃薯液时，小心勿使液体溅出。 2．加液体石蜡时宜斜执试管，沿管壁缓缓加入，不要产生气泡；加入的液体石蜡必需完全 覆盖液面，以隔绝空气