◆经提取的基因组DNA是由染色体断裂而 成的数百kp大小的长片段构成 ◆长片段的进一步切割 ■物理剪切—利用振荡、超声等物理方法剪切 可以非常随机地进一步将长片段切割成小片 段,片段末端通常都是平末端 限制性酶解一位点非随机分布
经提取的基因组DNA是由染色体断裂而 成的数百kp大小的长片段构成 长片段的进一步切割 n 物理剪切—利用振荡、超声等物理方法剪切 可以非常随机地进一步将长片段切割成小片 段，片段末端通常都是平末端 n 限制性酶解—位点非随机分布
基因组DNA片段的限制性内切酥酥解 ◆使用限制性内切酥酶解基因组DNA可产 生非随机片段,为了获得15-25kb的或 更大的基因组DNA片段(适用于A噬菌 体或黏粒载体的片段),需要进行部分 酶解。即通过合理使用限制性内切酶 (种类和用量),调节酶切片段的大小 ◆合适的酶切片段可由琼脂糖凝胶电泳或 蔗糖梯度纯化回收
基因组DNA片段的限制性内切酶酶解 使用限制性内切酶酶解基因组DNA可产 生非随机片段，为了获得15－25kb的或 更大的基因组DNA片段（适用于λ噬菌 体或黏粒载体的片段），需要进行部分 酶解，即通过合理使用限制性内切酶 （种类和用量），调节酶切片段的大小 合适的酶切片段可由琼脂糖凝胶电泳或 蔗糖梯度纯化回收
载体 ◆质粒 较小的 大腸杆,用质粒载体来构建基因组文 库,只需5000个克隆就可以达到高于99 %的覆盖率 ◆构建较大的基因组文库 *九噬菌体最大可插入片段,23kb 黏粒45kb 细菌人工染色体(BAC)—350kb 酵母人工染色体(YAC)—1000kb
载体 质粒载体—用于基因组较小的生物，如 大肠杆菌，用质粒载体来构建基因组文 库，只需5000个克隆就可以达到高于99 ％的覆盖率 构建较大的基因组文库 n *λ噬菌体—最大可插入片段，23kb n 黏粒—45kb n 细菌人工染色体（BAC）—350kb n 酵母人工染色体(YAC)—1000kb
基因组DNA文库的构建流程 Genomic Library 提取 Genomic dNA Randomly cut 气三三 蓬合 转化 Ligate Transform ③e
基因组DNA文库的构建流程 提取 切割 整合 转化
质粒载体 ○Oo
质粒载体