名称 第四章目的基因的制备 目的 了解原核细胞和真核细胞的基因组成,理解基因组文库、cDNA基因 文库的概念,掌握cDNA基因文库的构建及目的基因的分离,并能利用聚 要求 合酶链式反应技术扩增目的基因 重点 cDNA基因文库的构建及目的基因的分离:利用聚合酶链式反应技术 增目的基因,基因组文库的构建以及筛选目的基因片段的差别杂交及减 法杂交技术 教学组织 教学方法 第一节目的基因及目的基因的制备 2学时 基本概念及组成 1.目的基因 2.结构基因的组成 3.原核生物基因的组成 4.真核生物基因的组成 5.其它基因的组成 、直接分离法 限制性核酸内切酶酶切分离法 2.双抗体免疫法分离编码蛋白的基因 3.利用酶促反转录法直接从特定mRNA分离基因 构建基因组文库分离法 四、cDNA基因文库的构建及目的基因分离 采用引导 五、利用聚合酶链式反应技术扩增目的基因 式的教学 六、基因的化学合成 讲授法, 第二节目的基因的分离 并辅助多 目的基因的功能克隆 媒体课件 1.根据特异蛋白分离目的基因 2.功能互补法克隆基因 序列克隆法 、筛选目的基因片段的差别杂交及减法杂交技术 四、利用差示分析法分离目的基因克隆 功能结合法筛选目的基因 六、DNA插入诱变法分离目的基因
名 称 第四章 目的基因的制备 目 的 要 求 了解原核细胞和真核细胞的基因组成，理解基因组文库、cDNA 基因 文库的概念，掌握 cDNA 基因文库的构建及目的基因的分离，并能利用聚 合酶链式反应技术扩增目的基因。 重 点 难 点 cDNA 基因文库的构建及目的基因的分离；利用聚合酶链式反应技术 扩增目的基因，基因组文库的构建以及筛选目的基因片段的差别杂交及减 法杂交技术。 时 间 教学组织 教学方法 2 学时 第一节 目的基因及目的基因的制备 一、基本概念及组成 1．目的基因 2．结构基因的组成 3．原核生物基因的组成 4．真核生物基因的组成 5．其它基因的组成 二、直接分离法 1．限制性核酸内切酶酶切分离法 2．双抗体免疫法分离编码蛋白的基因 3．利用酶促反转录法直接从特定 mRNA 分离基因 三、构建基因组文库分离法 四、cDNA 基因文库的构建及目的基因分离 五、利用聚合酶链式反应技术扩增目的基因 六、基因的化学合成 第二节 目的基因的分离 一、目的基因的功能克隆 1.根据特异蛋白分离目的基因 2.功能互补法克隆基因 二、序列克隆法 三、筛选目的基因片段的差别杂交及减法杂交技术 四、利用差示分析法分离目的基因克隆 五、功能结合法筛选目的基因 六、DNA 插入诱变法分离目的基因 采用引导 式的教学 讲授法， 并辅助多 媒体课件
名称 第五章目的基因导入受体细胞 理解受体细胞、转化、转导、感受态细胞、转化率、体外包装等相关 目的|概念:掌握感受态细胞的制备方法,核酸分子杂交检测法来筛选重组子 要求|重组噬菌体DN分子转导大肠杆菌:了解重组DNA分子转入真核细胞 重点 感受态细胞的制备,重组质粒DNA分子转化大肠杆菌,重组λ噬菌 体DNA分子转导大肠杆菌,核酸分子杂交检测法 难点 教学组织 教学方法 第一节受体细胞 4学时 、原核生物细胞 1.原核生物细胞成为理想受体细胞类型的原因? 2.为什么说有为数不少的真核生物基因不能在大肠杆菌中 表达出具有生物活性的功能蛋白? 、真菌细胞 为什么说酵母菌是最理想的真菌受体细胞? 植物细胞 四、动物细胞 第二节重组DNA分子转入原核生物 、重组质粒DNA分子转化大肠杆菌 1.以革兰氏阳性细茵为例,细菌转化的一种可能基本步骤, 即原生质体化假说。 采用启发 2.支持该假说的理由及证据 式与问答 、重组入噬菌体DNA分子转导大肠杆菌 式相结合 1.体外包装 的教学方 2.入噬菌体DNA体外包装的主要过程 法,并通 受体细胞的选择 过网络查 1.受体细胞的选择依据 阅相关的 四、重组DNA分子转入真核细胞 文献资料 1.重组DNA分子转入植物细胞 使教学内 农杆菌介导的Ti质粒载体转化法 容不段创 2.重组DNA分子导入哺乳动物细胞 新 第三节重组子的筛选 遗传表型直接筛选法 1.根据载体选择标记初步筛选转化子 1)抗药性筛选 2)插入失活筛选法 3)插入表达筛选法 4)显色互补筛选法 5)利用报告基因筛选植物转化细胞 6)利用遗传选择标记筛选哺乳动物转基因细胞 2.依赖于重组子结构特征分析的筛选法 核酸分子杂交检测法
名 称 第五章 目的基因导入受体细胞 目 的 要 求 理解受体细胞、转化、转导、感受态细胞、转化率、体外包装等相关 概念；掌握感受态细胞的制备方法，核酸分子杂交检测法来筛选重组子， 重组 λ 噬菌体 DNA 分子转导大肠杆菌；了解重组 DNA 分子转入真核细胞。 重 点 难 点 感受态细胞的制备，重组质粒 DNA 分子转化大肠杆菌，重组 λ 噬菌 体 DNA 分子转导大肠杆菌，核酸分子杂交检测法。 时 间 教学组织 教学方法 4 学时 第一节 受体细胞 一、原核生物细胞 1．原核生物细胞成为理想受体细胞类型的原因？ 2．为什么说有为数不少的真核生物基因不能在大肠杆菌中 表达出具有生物活性的功能蛋白？ 二、真菌细胞 1．为什么说酵母菌是最理想的真菌受体细胞？ 三、植物细胞 四、动物细胞 第二节 重组 DNA 分子转入原核生物 一、重组质粒 DNA 分子转化大肠杆菌 1．以革兰氏阳性细茵为例，细菌转化的一种可能基本步骤， 即原生质体化假说。 2.支持该假说的理由及证据 二、重组入噬菌体 DNA 分子转导大肠杆菌 1．体外包装 2．入噬菌体 DNA 体外包装的主要过程 三、受体细胞的选择 1．受体细胞的选择依据 四、重组 DNA 分子转入真核细胞 1．重组 DNA 分子转入植物细胞 农杆菌介导的 Ti 质粒载体转化法 2．重组 DNA 分子导入哺乳动物细胞 第三节 重组子的筛选 一、遗传表型直接筛选法 1．根据载体选择标记初步筛选转化子 1）抗药性筛选 2）插入失活筛选法 3）插入表达筛选法 4）显色互补筛选法 5）利用报告基因筛选植物转化细胞 6）利用遗传选择标记筛选哺乳动物转基因细胞 2. 依赖于重组子结构特征分析的筛选法 二、核酸分子杂交检测法 采用启发 式与问答 式相结合 的教学方 法，并通 过网络查 阅相关的 文献资料 使教学内 容不段创 新
、免疫化学检测法 四、转译筛选法
三、免疫化学检测法 四、转译筛选法
名称 第六章外源基因的表达 理解启动子、增强子、终止子、衰减子、绝缘子、反义子等概念;掌 目的握外源基因在大肠杆菌基因表达系统中的表达形式、酵母表达系统中酵母 基因表达载体即其种类、免疫学检测法,而在基因表达产物的分离纯化上 要求|只掌握柱层析法:对芽孢杆菌表达系统和链霉菌表达系统等原核生物基因 表达系统仅作了解 重 基因表达的机制,外源基因表达系统,包括原核生物表达系统和真核 难点生物表达系统:基因表达的调控序列:酵母基因表达载体,哺乳动物基因 表达载体 时间 教学组织 教学方法 第一节基因表达的机制 6学时 、外源基因的起始转录 、mRNA的延伸与稳定性 外源基因mRNA的有效翻译 四、表达蛋白在细胞中的稳定性 五、目的基因沉默 第二节基因表达的调控元件 启动子 、增强子 采用启发 式与问答 终止子 式相结合 四、衰减子 的教学方 法,并通 五、绝缘子 过网络查 六、反义子 阅相关的 文献资料 第三节外源基因表达系统 使教学内 、大肠杆菌基因表达系统 容不段创 、芽孢杆菌表达系统 、链霉菌表达系统 四、蓝藻表达系统 五、酵母表达系统 六、哺乳动物细胞基因表达系统 七、植物细胞基因表达系统 第四节基因表达产物的检测与分离纯化
名 称 第六章 外源基因的表达 目 的 要 求 理解启动子、增强子、终止子、衰减子、绝缘子、反义子等概念；掌 握外源基因在大肠杆菌基因表达系统中的表达形式、酵母表达系统中酵母 基因表达载体即其种类、免疫学检测法，而在基因表达产物的分离纯化上 只掌握柱层析法；对芽孢杆菌表达系统和链霉菌表达系统等原核生物基因 表达系统仅作了解。 重 点 难 点 基因表达的机制，外源基因表达系统，包括原核生物表达系统和真核 生物表达系统；基因表达的调控序列；酵母基因表达载体，哺乳动物基因 表达载体。 时 间 教学组织 教学方法 6 学时 第一节 基因表达的机制 一、外源基因的起始转录 二、mRNA 的延伸与稳定性 三、外源基因 mRNA 的有效翻译 四、表达蛋白在细胞中的稳定性 五、目的基因沉默 第二节 基因表达的调控元件 一、启动子 二、增强子 三、终止子 四、衰减子 五、绝缘子 六、反义子 第三节 外源基因表达系统 一、大肠杆菌基因表达系统 二、芽孢杆菌表达系统 三、链霉菌表达系统 四、蓝藻表达系统 五、酵母表达系统 六、哺乳动物细胞基因表达系统 七、植物细胞基因表达系统 第四节 基因表达产物的检测与分离纯化 采用启发 式与问答 式相结合 的教学方 法，并通 过网络查 阅相关的 文献资料 使教学内 容不段创 新
、基因表达产物的检测 、基因表达产物的分离纯化
一、基因表达产物的检测 二、基因表达产物的分离纯化