讨论— 影响分离的因素与提高柱效的途径 在高效液相色谱中，液体的扩散系数仅为气体的万分之一， 则速率方程中的分子扩散项B较小，可以忽略不计，即： H=A+Cu 故液相色谱H-曲线与气相色谱的形状不同。 GC LC 液体的粘度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故降低 传质阻力是提高柱效主要途径
在高效液相色谱中, 液体的扩散系数仅为气体的万分之一， 则速率方程中的分子扩散项B/u较小，可以忽略不计，即： H = A + C u 故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同。 液体的粘度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故降低 传质阻力是提高柱效主要途径。 讨论——影响分离的因素与提高柱效的途径
1.固定相粒度 由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。 H oc 液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。 改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素
• 由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。 • 液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。 • 改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。 1. 固定相粒度 2 p H d
2.流速 流速大于0.5 cm/s时， H GC Hu曲线是一段斜率不大的 LC 直线。降低流速，柱效提高 不是很大。 u 3.固定相及分离柱 气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选 用原则与气相色谱一样。 但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非 常高的工作，一般很少自行制备
2.流速 流 速 大 于 0.5 cm/s 时 , H～u曲线是一段斜率不大的 直线。降低流速，柱效提高 不是很大。 3.固定相及分离柱 气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选 用原则与气相色谱一样。 但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非 常高的工作，一般很少自行制备
HPLC的主要类型及其分离原理 液-液分配色谱 固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 基本原理：组分在固定相和流动相间的分配： 流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流 动相的极性小于固定液的极性（正相normal phase)，反之 ,流动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase) 正相与反相的出峰顺序相反； 固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合 到硅胶（担体）表面的游离羟基上。 C-18柱（反相柱)
固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 基本原理：组分在固定相和流动相间的分配； 流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流 动相的极性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之 ，流动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）。 正相与反相的出峰顺序相反； 固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合 到硅胶（担体）表面的游离羟基上。 C-18柱（反相柱）。 HPLC的主要类型及其分离原理 一、 液-液分配色谱
液-固吸附色谱 固定相：为固体吸附剂，如硅胶、氧化铝等，较常使用 的是5~10μm的硅胶吸附剂； 流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸； 适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能 团的化合物和异构体有较高选择性； 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；
固定相：为固体吸附剂，如硅胶、氧化铝等，较常使用 的是5～10μm的硅胶吸附剂； 流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸； 适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能 团的化合物和异构体有较高选择性； 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾； 二、 液-固吸附色谱