cDNA探针 1)双链探针:基因组DNA探针 特异mRNA提取、纯化 →酶切 逆转录 CDNA 重组质粒扩增 电泳分离 双链DNA 重组 片段回收 和标记 基因组DNA片段
cDNA探针 基因组DNA探针 电泳分离 特异mRNA cDNA 双链DNA 重组 重组质粒扩增 提取、纯化 酶切 片段回收 和标记 逆转录 1）双链探针： 基因组DNA片段
2)单链DNA探针 将靶序列克隆于适 当的M13噬菌体载 MMA通用引物 体中,分离带有靶 CACAATTTCACACAAC 序列的单链DNA 4种dNTP 1种3P-dCTP 大肠杆菌DNA聚合 或Dg-dUTP 酶 I Klenow片段 限制性内切酶
2）单链DNA探针 通用引物 大肠杆菌DNA聚合 酶I Klenow片段 4种dNTP 1种32P-dCTP 或Dig-dUTP 限制性内切酶 将靶序列克隆于适 当的M13噬菌体载 体中，分离带有靶 序列的单链DNA CACAATTTCACACAAC
大入大 大入 变性凝胶电泳 模板DNA 标记的DNA markers 标记DNA 3端片段
变性凝胶电泳 markers 模板DNA 标记的DNA 标记DNA 3’端片段
3)RNA探针制备 多克隆位点 T7启动子 SP6启动子 将靶序列克隆于 pGEM载体 限制性内切酶
3）RNA探针制备 多克隆位点 T7启动子 SP6启动子 将靶序列克隆于 pGEM载体 限制性内切酶
T7启动子 SP6启动子 4种NTP,种32PCTP SP6噬菌体依赖于 或 Dig-UTP DNA的RNA聚合酶 用DNA酶I消化除 去模板DNA 标记的RNA 体外转录系统
SP6噬菌体依赖于 DNA的RNA聚合酶 4种NTP,1种32P-CTP 或Dig-UTP 用DNA酶I消化除 去模板DNA 标记的RNA T7启动子 SP6启动子 体外转录系统