常用技术第二章核酸杂交技术 nucleic acid hybridization 潘銮凤Ifpan@shu.edu.cn
常用技术第二章 核酸杂交技术 nucleic acid hybridization 潘銮凤 lfpan@shmu.edu.cn
第一节核酸杂交原理 及探针的制备
第一节 核酸杂交原理 及探针的制备
/一、实验原理 待检基因w核 杂交探针: 基因组 复性 酸变 CDNA RNA √性 寡核苷酸 杂交:碱基互补,>连续4bp形成双链 连续17bp人基因特异杂交
一、实验原理 核 酸 变 性 待检基因 杂交探针： 基因组 cDNA RNA 寡核苷酸 复性 杂交：碱基互补，>连续4bp形成双链 >连续17bp人基因特异杂交
傅/二、DNA的变性( (denaturation) 在一定条件下,DNA双链间的氢键断裂, 最后双链分开成为无规则线团,而核酸单链分 子中的所有共价键则不受影响,称为DNA变性。 DNA变性的常用方法: 1)热变性 2)酸、碱变性:pH<3,pH>10 3)化学试剂:尿素、甲酰胺、甲醛等
二、DNA的变性 (denaturation) 在一定条件下，DNA双链间的氢键断裂， 最后双链分开成为无规则线团，而核酸单链分 子中的所有共价键则不受影响, 称为DNA变性。 DNA变性的常用方法： 1）热变性 2）酸、碱变性：pH<3, pH>10 3）化学试剂：尿素、甲酰胺、甲醛等
退火 退火 双螺旋DNA 加热 部分解链加热 单股随机卷出 图7-1DNA变性和复性