PCR相关技术：1.增效PCR（boosterPCR)当扩增少于1000拷贝的模板DNA时会遇到两个问题：一是形成引物二聚体，一是非特异扩增，消耗了引物和酶，而特异扩增片段产量降低。对于这种情况，可设置二步PCR，先用较低浓度的引物进行初级PCR，此时由于引物少，形成引物二聚体的可能减少，但它并不影响靶序列的扩增只是由于引物少产量不高。约经15～20个循环后补充产物量，以初级PCR产物为模板进行扩增靶序列的产量将相应增加
6 PCR相关技术： 1.增效PCR（booster PCR） 当扩增少于1000拷贝的模板DNA时会遇到两个问 题：一是形成引物二聚体，一是非特异扩增，消 耗了引物和酶，而特异扩增片段产量降低。对于 这种情况，可设置二步PCR，先用较低浓度的引 物进行初级PCR，此时由于引物少，形成引物二 聚体的可能减少，但它并不影响靶序列的扩增， 只是由于引物少产量不高。约经15～20个循环后 补充产物量，以初级PCR产物为模板进行扩增， 靶序列的产量将相应增加
2.巢式PCR(nest PCR)此时也是进行二步PCR，与上面不同的是第二级PCR需另行设置反应体系，并应用另外的PCR引物，此时引物的位置位于初级PCR引物的内侧，用初级PCR产物做模板进行第二步PCR，这样只有初级PCR中特异的扩增片段才能被二级引物扩增除了达到增效PCR同样的目的外，还提高了最终产物的特异性
7 2. 巢式PCR（nest PCR） 此时也是进行二步PCR，与上面不同的是， 第二级PCR需另行设置反应体系，并应用另 外的PCR引物，此时引物的位置位于初级 PCR引物的内侧，用初级PCR产物做模板， 进行第二步PCR，这样只有初级PCR中特异 的扩增片段才能被二级引物扩增。 除了达到增效PCR同样的目的外，还提高了 最终产物的特异性
3、多重PCR在同一PCR体系中加入数对PCR引物，如果这些引物的退火温度相近，并且所覆盖的区域不重叠，这样的反应体系可同时扩增多个DNA片段。多重PCR常用来检测同一基因的多个外显子的缺失，或在检测缺失设置内对照
8 ⚫ 在同一PCR体系中加入数对PCR引物，如果 这些引物的退火温度相近，并且所覆盖的 区域不重叠，这样的反应体系可同时扩增 多个DNA片段。 ⚫ 多重PCR常用来检测同一基因的多个外显子 的缺失，或在检测缺失设置内对照。 3、多重PCR
4.RT-PCRRT-PCR是以mRNA为模板，经逆转录酶作用合成cDNA。使微量的mRNA（pg水平）迅速扩增（达ng～ug水平），大大提高mRNA的检出灵敏度。应用于基因表达与调控的研究
9 4.RT-PCR ⚫ RT-PCR是以mRNA为模板，经逆转录酶作 用合成cDNA。使微量的mRNA（pg水平） 迅速扩增（达ng～ug水平），大大提高 mRNA的检出灵敏度。应用于基因表达与 调控的研究