蛋白质的SDS-PAGE分离及转膜 复旦大学基础医学院医学实验教学中心 王松梅 021-54237330;smwang2@fudan.edu.cn
蛋白质的SDS-PAGE分离及转膜 复旦大学基础医学院医学实验教学中心 王松梅 021-54237330; smwang2@fudan.edu.cn •1
实验目的 .掌握 SDS-PAGE分离蛋白质的原理和技术 2.掌握半干转移的操作和 Western Blot的原理和技术
一、实验目的 1. 掌握SDS-PAGE分离蛋白质的原理和技术 2. 掌握半干转移的操作和Western Blot 的原理和技术 •2
、实验原理 SDS-PAGE电泳(不连续系统 2.转膜(半干转移法)
二、实验原理 1. SDS-PAGE电泳(不连续系统) 2. 转膜(半干转移法) •3
1 SDS-PAGE分离蛋白质 SDS的作用 ①裂解细胞膜、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋 白分子内的疏水作用、去多肽折叠 ②蛋白质SS复合物(1g:1.4g),长椭圆棒形 掩盖了蛋白质原有电荷差别 迁移率是分子量的函数
1.SDS-PAGE分离蛋白质 •4 SDS的作用: ① 裂解细胞膜、解离蛋白质之间的氢键、 取消蛋 白分子内的疏水作用、去多肽折叠 ②蛋白质-SDS复合物（1g : 1.4g）,长椭圆棒形 掩盖了蛋白质原有电荷差别 迁移率是分子量的函数
1 SDS-PAGE分离蛋白质 不连续体系由电泳缓冲液,浓缩胶,分离胶组成 1)浓缩胶为大孔径胶,凝胶缓冲液PH67的Tris-Hc 2)分离胶为小孔径胶,凝胶缓冲液PH89的Trs-HC 3)电泳缓冲液PH83的Trs甘氨酸缓冲液
1.SDS-PAGE分离蛋白质 不连续体系由电泳缓冲液，浓缩胶，分离胶组成 1）浓缩胶为大孔径胶，凝胶缓冲液PH6.7的Tris-HCI 2）分离胶为小孔径胶，凝胶缓冲液PH8.9的Tris-HCI 3）电泳缓冲液PH8.3的Tris-甘氨酸缓冲液 •5