实验二重组DNA的 提取及酶切鉴定 复旦大学上海医学院医学实验教学中心 王松梅 021-54237330;smwang2@fudan.edu.cn
1 实验二 重组DNA的 提取及酶切鉴定 复旦大学上海医学院医学实验教学中心 王松梅 021-54237330; smwang2@fudan.edu.cn
、实验目的 掌握以下方法和技术: 1.质粒DNA的小量快速制备 2.质粒DNA的限制性内切酶酶切 3.DNA的琼脂糖凝胶电泳
2 一、实验目的 掌握以下方法和技术： 1. 质粒DNA的小量快速制备 2. 质粒DNA的限制性内切酶酶切 3. DNA的琼脂糖凝胶电泳
二、实验原理 1.质粒DNA的小量快速制备 分离质粒DNA有三个步骤: 1)培养细菌使质粒扩增 2)收集和裂解细菌(本实验:SDS裂解) 3)分离和纯化质粒DNA(本实验:碱变性法)
3 二、实验原理 分离质粒DNA有三个步骤： 1） 培养细菌使质粒扩增 2） 收集和裂解细菌（本实验：SDS裂解） 3）分离和纯化质粒DNA（本实验：碱变性法） 1. 质粒DNA的小量快速制备
碱变性法抽提质粒DNA Solution II Solution III 离心后去向 pH12. 6 pH4.8 染色体DNA 氢键断裂,双螺 旋解开 不能完全复性沉淀中 氢键部分断裂, 质粒 DNA CCcDNA互补链复性 上清中 不完全分离
4 碱变性法抽提质粒DNA Solution II pH12.6 Solution III pH4.8 离心后去向 染色体DNA 氢键断裂，双螺 旋解开 不能完全复性 沉淀中 质粒DNA 氢键部分断裂， cccDNA互补链 不完全分离 复性 上清中
质粒的纯化方法 层析法:常用 离心法:经典,纯度高 达电泳法 沉淀法:大量
质粒的纯化方法 层析法：常用 离心法：经典，纯度高 电泳法 沉淀法：大量