荧光原位杂交实验 (fluorescent in situ hybridization, FISH) 潘銮凤王松梅 Ifpanashmu. edu. cn smwang2@fudan.edu.cn
荧光原位杂交实验 （fluorescent in situ hybridization，FISH） 潘銮凤 王松梅 lfpan@shmu.edu.cn smwang2@fudan.edu.cn
、实验目的 FISH检测白血病细胞系H-60中的c-myc基因 扩增情况 ·掌握核酸杂交的基本原理、过程和操作 ·熟练掌握荧光显微镜的使用方法 掌握 Image J等软件进行图像融合的方法 ·理解荧光原位杂交技术的应用
一、实验目的 • 掌握核酸杂交的基本原理、过程和操作 • 熟练掌握荧光显微镜的使用方法 • 掌握Image J等软件进行图像融合的方法 • 理解荧光原位杂交技术的应用 FISH检测白血病细胞系HL-60中的c-myc基因 扩增情况
实验原理 ◆核酸杂交是以碱基互补为基础、以双链核酸分子在特定条件下的 变性和复性为手段,对核酸分子进行定性和定量检测 ◆两条互补的核苷酸单链在特定的条件下退火形成异质双链 待检基因 杂交探针: 核酸 基因组 变性 复性 CDNA RNA 寡核苷酸 杂交 杂交:碱基互补 >连续4bp形成双链 >连续17bp人基因特异杂交
二、实验原理 核酸杂交是以碱基互补为基础、以双链核酸分子在特定条件下的 变性和复性为手段，对核酸分子进行定性和定量检测 两条互补的核苷酸单链在特定的条件下退火形成异质双链 核酸 变性 待检基因 杂交探针： 基因组 cDNA RNA 寡核苷酸 杂交 杂交：碱基互补 >连续4bp形成双链 >连续17bp人基因特异杂交 复性
实验原理 核酸杂交方法 Southern blot: DNA Northern blot: rna 原位杂交:组织、细胞、菌落、染色体 斑点杂交( dot blotting) 液相杂交
二、实验原理 核酸杂交方法 • Southern blot: DNA • Northern blot: RNA • 原位杂交：组织、细胞、菌落、染色体 • 斑点杂交(dot blotting） • 液相杂交
原位杂交( in situ hybridization,SH ISH始于20世纪60年代,是分子生物学、组织化学、细胞学相 结合而产生的一门新兴技术 将标记的DNA或者RNA探针与细胞或组织中的核酸进行杂交,检 测与其互补的另一条链在细胞中的情况,包括扩增、易位、表 达等 原位杂交常用标记物质 放射性国同位素 70年代 3H、35s、125、32P等 放射科物80年代中后期 荧光素、生物素、地高辛等 直接FSH间接FSH:杂交后,以针对半抗原的荧光 物质标记的抗体进行探针检测
原位杂交（in situ hybridization,ISH) •ISH始于20世纪60年代，是分子生物学、组织化学、细胞学相 结合而产生的一门新兴技术 •将标记的DNA或者RNA探针与细胞或组织中的核酸进行杂交,检 测与其互补的另一条链在细胞中的情况，包括扩增、易位、表 达等