第四章分子生物学常用技术
第四章 分子生物学常用技术
I.核畯分子杂交(DNA/ dnA or dna/RNA)技术 核酸分子杂交技术。是在1968年由华盛顿卡内基 学院( Cavnegie Institute of Washington)的Roy Britten及其同事发明的。所依据的原理是,带有互补 的特定核苷酸序列的单链DNA或RNA.当它们混合在 起时,其相应的同源区段将会退火形成双筵的结构
Ⅰ.核酸分子杂交（DNA/DNA or DNA/RNA）技术 核酸分子杂交技术，是在1968年由华盛顿卡内基 学院（Cavnegie Institute of Washington）的Roy Britten及其同事发明的。所依据的原理是，带有互补 的特定核苷酸序列的单链DNA或RNA，当它们混合在一 起时，其相应的同源区段将会退火形成双链的结构
萨瑟恩DNA印迹杂交 根据毛细管作用的原理,使在电泳凝胶中分离的DNA 片段转移并结合在适当的滤膜上,然后通过同标记的单链DNA 或RNA探针的杂交作用检测这些被转移的DNA片段。这种实验 方法叫做DNA印迹杂交技术。由于它是由E. Southern于1975年 首先设计出来的,故又叫 Southern dna印迹转移技术
1、萨瑟恩DNA印迹杂交 根据毛细管作用的原理，使在电泳凝胶中分离的DNA 片段转移并结合在适当的滤膜上，然后通过同标记的单链DNA 或 RNA探针的杂交作用检测这些被转移的DNA片段，这种实验 方法叫做DNA印迹杂交技术。由于它是由E.Southern于1975年 首先设计出来的，故又叫Southern DNA 印迹转移技术
(a) DNA限制片段 含有EBr染料 的琼脂糖凝胶 Southern凝(b 基因组DNA 标准分子量DNA 胶转移条交 重物 技术 玻璃板 吸引滤组 凝胶 一高盐缓冲液 (d)硝酸纤维素滤膜 同探针同源杂交的 基因DNA片段 (e) X光底片
（a） （b） （c） （d） （e） 基因组DNA DNA限制片段 硝酸纤维素滤膜 同探针同源杂交的 基因DNA片段 X光底片 Southern 凝 胶转移杂交 技术
A B( D E F GH-I JK I 5.0 = Southern dna印迹杂交之X光显像图片 水稻( Oryza sativa l)的叶绿体DNA分别用核酸内切限制酶Bg(A C)、BamI(D-F)、 ECoR I(G-I)、和HindⅢ(J-L)消化,加样在 含有EtBr染料的1%的琼脂糖凝胶电泳中作电泳分离,然后同32P标记的玉 米psbA探针作 Southern杂交。X光底片中显现的阳性条带,表明含有水 稻的psbA基因序列
Southern DNA 印迹杂交之X光显像图片 水稻（Oryza sativa L.)的叶绿体DNA分别用核酸内切限制酶BglⅡ(AC)、BamHⅠ（D-F）、EcoRⅠ（G-I）、和HindⅢ（J-L）消化，加样在 含有EtBr染料的1%的琼脂糖凝胶电泳中作电泳分离，然后同32P标记的玉 米psbA探针作Southern杂交。X光底片中显现的阳性条带 ，表明含有水 稻的psbA基因序列