2、诺赛恩RNA印迹技术( Northern blotting) 1979年,J.C. Alwine等人发展而来,是将RNA分子从电泳凝 胶转移到硝酸纤维素滤膜威其他化斝修伽的活性滤纸上。进行 核酸杂交的一种实验方法。由于这种方法与萨瑟恩DNA印迹杂交 技术十分类似,所以叫做诺赛恩RNA印迹技术( Northern blotting) 而将蛋白质从电泳凝胶中转移到硝酸纤维素滤膜上,然后 同放射性同位素125标记的特定蛋白质之抗体进行反应,这种技 术叫做韦斯顿蛋白质杂交技术( Western blotting)
2、诺赛恩RNA印迹技术（Northern blotting） 1979年，J.C.Alwine等人发展而来，是将RNA分子从电泳凝 胶转移到硝酸纤维素滤膜或其他化学修饰的活性滤纸上，进行 核酸杂交的一种实验方法。由于这种方法与萨瑟恩DNA印迹杂交 技术十分类似，所以叫做诺赛恩RNA印迹技术（Northern blotting）。 而将蛋白质从电泳凝胶中转移到硝酸纤维素滤膜上，然后 同放射性同位素125I标记的特定蛋白质之抗体进行反应，这种技 术叫做韦斯顿蛋白质杂交技术（Western blotting）
3、斑点印迹杂交和狭线印迹杂交 斑点印迹杂交( dot blotting)和狭线印迹杂交 ( slot blotting)是在 Southern印迹条交的基础上 发展的量种类式的快速检测特定核酸(DNA和RNA)分 子的核酸杂交技术。由于在实验的加样过程中使用了 特殊设计的加样装置,使众多待测样品能够一次同步 转移到杂交滤膜上,并有规律地排列成点阵或线阵。 这两项技术更适疝与核酸样品的定量检测
3、斑点印迹杂交和狭线印迹杂交 斑点印迹杂交（dot blotting）和狭线印迹杂交 （slot blotting ）是在Southern印迹杂交的基础上 发展的量种类式的快速检测特定核酸（DNA和RNA）分 子的核酸杂交技术。由于在实验的加样过程中使用了 特殊设计的加样装置，使众多待测样品能够一次同步 转移到杂交滤膜上，并有规律地排列成点阵或线阵。 这两项技术更适应与核酸样品的定量检测
4、菌落杂交 保留 盘 生长着转化菌落的平板 硝酸纤维素滤膜 平板 (b) 合 溶菌碱变性酸中和洗去细胞碎片 置于溶菌液中的滤膜 桃取阳性菌落 (d) 放射自显影 显示阳性菌落斑点的X光底片 具DNA印迹的滤膜 检测重组体克隆的菌落杂交技术
检测重组体克隆的菌落杂交技术 4、菌落杂交
核酸杂交常用几种膜的 性能比较 类型 优点 缺点 硝酸纤维素滤膜 结合 SsDNA、RNA和蛋白质的能力为 易碎、易皱缩;不能同DNA共价结合, 80~100g/cm2;价廉;可用于微量制备 因此再使用能力有限;在10×SSC缓冲液中 结合能力下降;要用特殊的程序才能结合 RNA或小片段DNA DBM/DPT滤纸 结合 ssDNA、RNA和蛋白质的能力为 杂交作用没有硝酸纤维素滤膜有效;需 20~40g/cm2;能同核酸及蛋白质分子共价要化学激活;时间、温度和pH值等因素不 稳定地结合;可以用不同的探针进行成功的稳定性价格昂贵 检验 DEAE滤纸 结合dDNA、RNA的能力为15g/结合 DNA, RNA的能力有限;易碎 cm2;可定量地回收DNA Nylon(尼龙)滤膜 结合DNA,RNA和蛋白质;检测敏感 有些类型会出现较高的本底 性高;柔性好;抗热抗溶解作用;不需要预浸
核酸杂交常用几种膜的 性能比较
Ⅱ.蛋白质/DNA、蛋白质/RNA杂交技术
Ⅱ. 蛋白质/DNA、蛋白质/RNA杂交技术