14 食品微生物学买验技术 向玻片两侧稍滑动几下使黑素敢开，再以均匀速度向涂片部位推动，通过涂片部位使之成 ·均匀而月薄适中的薄层，自然干燥。也可用绘图墨水1滴，滴于涂片部位附近，再用 另一玻片的一端接触墨滴，使之向旁边散开，然后拉过涂片部位，注意墨滴不可太大。 (6)镜检、绘图 操作中应注意的向题：由于荚膜中含有大量的水分和多糖或多肽类物质，因而受热时 容幼失水收缩使密体变形，所以染色时不要加热固定。 实验2.5细菌鞭毛染色及运动性的检查 一、目的 学可并掌握细菌鞭毛染色及运动性检查的原理及方法。 二、原理 细芮鞭毛的若生部位是细菌分类的重要特征之一，但它们非常纤细，直径001 0.02m,在普道光学显微镜下不能看到，必须经特殊的染色方法，使染料堆积在鞭毛.上 将鞭毛加粗，才能在普通光学显微镜下观察到细菌鞭毛的着生部位和形状。 另外，也可以通过细菌运动性的检查，来判断细菌是否具有鞭毛，但不能测定鞭毛的 数量。当然，细随依赖鞭毛的运动方式，与鞭毛的排列形式和数目有关，但根据细茵的运 动方式、对鞭毛的数日和排列形式只能作大致判断。单毛菌和从毛菌多做直线运动，周毛 菌多做翻转运动。依赖鞭毛的运动称为真性运动。无鞭毛细菌做左右颤动而不改变其位 肾，这种运动称为非真性运动。 三、材料 1.荣种枯草杆菌（培养24h以内） 2.仪器及其他显微镜、接种环、酒精灯、无菌燕馏水、载玻片、盖玻片、鞭毛染 色液。 四、方法与步骤 1.鞭毛染色法 (1)涂片在栽玻片的一端滴一滴无菌蒸馏水，用接种环挑取菌苔，在载玻片水滴中 轻轻沾几下，将玻片倾斜，使菌液随水滴缓缓流到玻片另-一端，然后平放在空气中干燥 (或放入37心保温箱中干燥)，不宜用火焰加热固定。 (2)染色滴加鞭毛染色液，染10~【5min,染色时间长短随室温高低而不同，在冬 委可置37心温箱中染色。 (3)水洗水洗1~2m,在室温或温箱中干燥后再作镜检、绘图，蓝体和鞭毛均呈 红鱼 2.细菌运动性的检查（压滴法） m.food恤ate.net食品伙伴网交流资料
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第二章原核微牛物的形态结构观察 15 在载玻片上滴加一滴蒸馏水（水滴不要太小），挑取随苔少许混合于水满中，加盖玻 片后即可进行镜检，此时光线宜弱，可通过下降聚光器，缩小虹彩光圈和用平面镜反光来 调节。 实验2.6细菌细胞中异染粒的染色观察 一、目的 了解细菌细胞中异染粒的染色原理，掌捏其操作方法。 二、原理 当异染粒被美蓝染色时，它呈现出与细胞质其他部分颜色不同的红色或装红色，因而 被称为异染粒。除细菌外，其他的微生物如真齿、藻类和原生动物均含有异染粒。异染粒 的主要化学组分是大分子的聚偏磷酸盐。 当细胞中缺少营养物质特别是缺硫时，可导致生成大量的多聚萨酸盐。若再供给硫， 则多聚磷酸盐将消失，并参与核酸合成。可见，异染粒的重要功能是当核酸合成受阻时， 它作为磷酸盐保存形式存在于细胞内。 三、材料 1.菌种枯草芽孢杆菌 2.试剂奈瑟氏(Neisser)甲液、奈瑟氏乙液 四、方法与步骤 【.制片按前述常规方法进行。 2.染色用奈瑟氏甲液染标本30~60s,水洗，再用奈瑟氏乙液染色305，水洗。 3.镜检干后镜检菌体呈黄褐色，异染粒呈深紫色。 实验2.7细菌培养特征的观察 一、目的 培养特征是指微生物在培养基上所表现的群体形态和生长情况。菌落是指个体微生物 在固体培养基上紫殖成的肉眼可见的群体。培养特征包括茵落特征、斜面培养特征及液体 培养时的生长特征，它是认识微生物和微生物分类的重要依据。通过实验掌握观察细蘭培 养特征的方法。 二、材料 培养凰、试管、酒精灯、接种环、藤黄八叠球菌、大肠杆菌、荧光极毛杆菌、枯草芽 m.foodmate,net食品伙件网交流资村
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16 贪品微生物学实验技术 孢杆菌、尊状芽孢杆菌(Bacillus my心oides)、肉膏蛋白豚琼脂培养基、无菌水 三、方法与步骤 (一)表面菌落特征的观察 1.接种方法有划线法即用接种环直接挑取菌苔在培养皿内培养基表而划线培养 该方法简便，但不易掌握，常常由于挑取菌芬过多，因而得不到单个菌落。为·种方法 是稀释倾注法脚用接种环取荫苔于无南水试管中，制成菌卷液，以10倍稀释法配成 10~l一105稀释度的稀释液，取后两个稀释度的稀释液各0.5ml加入无菌培养皿中， 到入融化好的培养基(45℃左右)，混合均匀，于37℃培养。也可采用稀释涂布法，即 先倒制平板，然后取适当稀释度的菌悬液0.2m于平板上，再用涂布器涂布，而后进 行培养。 2,容1载 一般细菌在肉膏蛋白胨琼脂培养基上培养3~7，再进行观察和记载。 培养时间过短，不易观察到应有的特征。 观察和记载时可参照图2-1和 图22，其项目为： (I)大小以菌落的直径为多 少毫米表示 (2)形状斑点状（直径在 lmm以下)、圆形、不规则状、放 射状、卷发状、根状等。 (3)表面光滑、皱、颗粒 状、同心环状、辐射状，龟裂状 等 (4)边缘光滑整齐，锯齿 图21细齿落的形状 1.到形 状、波状、袋叶片、有缘毛、多枝 不规则状3，缘毛状4.同心环状 5.丝状6.参发状7.极状8.规则敏射叶状 (5)隆起形状扩展、凸起、中四台状、突脐形、台状等。 《6)透明程度透明、半透明、不透明。 (7)额色黄色、乳白、乳黄等。 将本实验结果填入表2-1。 表21平板菌藩特征观察记录 温度一℃时间d 齿种 大小 形状 表 边 径起形状 颜色绘 m.food恤ate.net食品伙件网交流资料
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第二章京核微生物的形态结构观察 17 图22细菌菌落的隆起、边缘和表面状况 A-隆起：1.扩展2.稍凸尽3.隆起4，凸起5.乳头状6.装纹状凸起 7,中内台秋8.突脐形9.高凸起 B-边缘：1，光滑2.缺刻3.话齿4.被状5，裂叶状 6.相粒7.混杂波纹8.丝状9.树状 (二)斜面培养特征的观察 1,接种方式以无菌操作，用接种环挑取少量菌搭，在已制备好的试管斜面培养基 中央白管底向上直线划过斜面（切勿划破斜面表面），置37心下培养。 2.观察和记载一般细茵斜面培养经过3一5后，就可按下列项目观察和记载： (1)生长不生长、微弱生长、中等生长、旺篮生长。 (2)形状丝状、有小突起、有小刺、念珠状、扩展状、假根状、树状，如图23。 (3)表面光游、不平、皱褶、瘤状突起。 (4)颜色菌芦颜色（即非水溶性色素）、培养基颜色（即水溶性色素）。 (5)透明程度透明、不透明、半透明。 m.foodmate,net食品伙件网交流资村
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18 食品微生物学买验技术 团 00 群 23细菌斜酯培养特征 图24细菌液体培养特征 1.丝状 2利 念珠状 1.2环 3.浮膜状4.沉 表2-2斜面培养特征观察记录 度 时阀 种 生长 形状 表面 癞色 透明度 (三）液体培养特延的观察 将细随接人液体培养基试管中，经过【~3的培养即可进行观察，项目包括表面状 况，混浊程度、沉淀状况、有无气泡和色泽等，如图2-4。 实验2.8放线菌的形态及其菌落特征的观察 一、目的 放线菌是介于细菌与真菌之间的一类微生物，其菌体为丝状体，伸人培养基内的为基 内菌丝，也称惜养菌丝，生长在培养基表面的为气生菌丝。气生菌丝的上面可分化形成孢 子丝，有各种形状，如直立、波浪、蝶旋等。孢子丝可进一步分化形成孢子，孢于的形状 大小也不相同，是分类的重要依据。 放线菌的菌落早期和细菌菌落相似，后蝴形成孢子菌落呈粉状、干燥，有各种颜色， 呈同心圆放射状。 通过实验认识放线菌的茵丝及孢子丝的形态和放线荫的菌落特征。 二、材料 显微镜、载玻片、酒精灯、接种环、石炭酸复红、解剖刀、盖玻片、培养皿、高氏】 m.food恤ate.net食品伙件网交流资料
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